食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
10期
1038-1043
,共6页
刘晓彤%邬敏辰%殷欣%汪俊卿
劉曉彤%鄔敏辰%慇訢%汪俊卿
류효동%오민신%은흔%왕준경
木聚糖酶%二硫键%定点突变%耐热性
木聚糖酶%二硫鍵%定點突變%耐熱性
목취당매%이류건%정점돌변%내열성
xylanase%disulfide bridge%thermostability%site-directed mutagenesis
为提高米曲霉11家族中温木聚糖酶AoXyn11A的热稳定性,将AoXyn11A与源于Thermomyces lanuginosus的耐热木聚糖酶XynA进行三维结构比对分析,发现XynA的α-螺旋与β9-折叠之间存在一个二硫键;基于分子动力学模拟预测结果,利用定点突变技术在AoXyn11A的相应位置引入二硫键(Cys108-Cys152),获得突变酶AoXyn11AT;分别将AoXyn11A及其突变酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经纯化,获得重组AoXyn 11A和AoXyn 11AT,并分析比较温度对其酶活性的影响.结果显示,重组AoXyn11AT的最适温度为60℃,比重组AoXyn11A提高了5℃;其在50℃下的半衰期t150为71 min,较重组AoXyn1 1A (t150=25 min)提高了近2倍.研究表明二硫键对提高AoXyn11A的热稳定性有重要作用.
為提高米麯黴11傢族中溫木聚糖酶AoXyn11A的熱穩定性,將AoXyn11A與源于Thermomyces lanuginosus的耐熱木聚糖酶XynA進行三維結構比對分析,髮現XynA的α-螺鏇與β9-摺疊之間存在一箇二硫鍵;基于分子動力學模擬預測結果,利用定點突變技術在AoXyn11A的相應位置引入二硫鍵(Cys108-Cys152),穫得突變酶AoXyn11AT;分彆將AoXyn11A及其突變酶基因在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,經純化,穫得重組AoXyn 11A和AoXyn 11AT,併分析比較溫度對其酶活性的影響.結果顯示,重組AoXyn11AT的最適溫度為60℃,比重組AoXyn11A提高瞭5℃;其在50℃下的半衰期t150為71 min,較重組AoXyn1 1A (t150=25 min)提高瞭近2倍.研究錶明二硫鍵對提高AoXyn11A的熱穩定性有重要作用.
위제고미곡매11가족중온목취당매AoXyn11A적열은정성,장AoXyn11A여원우Thermomyces lanuginosus적내열목취당매XynA진행삼유결구비대분석,발현XynA적α-라선여β9-절첩지간존재일개이류건;기우분자동역학모의예측결과,이용정점돌변기술재AoXyn11A적상응위치인입이류건(Cys108-Cys152),획득돌변매AoXyn11AT;분별장AoXyn11A급기돌변매기인재대장간균BL21(DE3)중표체,경순화,획득중조AoXyn 11A화AoXyn 11AT,병분석비교온도대기매활성적영향.결과현시,중조AoXyn11AT적최괄온도위60℃,비중조AoXyn11A제고료5℃;기재50℃하적반쇠기t150위71 min,교중조AoXyn1 1A (t150=25 min)제고료근2배.연구표명이류건대제고AoXyn11A적열은정성유중요작용.
