食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
10期
1018-1024
,共7页
杨敏%喻晓蔚%吴厚军%徐岩
楊敏%喻曉蔚%吳厚軍%徐巖
양민%유효위%오후군%서암
毕赤酵母%华根霉脂肪酶%糖基化%MADLI-TOF-MS
畢赤酵母%華根黴脂肪酶%糖基化%MADLI-TOF-MS
필적효모%화근매지방매%당기화%MADLI-TOF-MS
Pichia pastoris%Rhizopus chinensis lipase%MADLI-TOF-MS%glycosylation
研究了毕赤酵母GS115中能够高效分泌表达的华根霉脂肪酶(r27RCLC)的糖基化情况.运用糖基化抑制剂衣霉素处理表达目的蛋白的毕赤酵母细胞,通过SDS-PAGE比较分析经衣霉素处理后的脂肪酶r27RCLC分泌表达量的变化,结果显示酶的分泌表达受到很大的抑制,说明脂肪酶r27RCLC在表达时候很可能发生了糖基化,且糖基化对其有重要影响.通过生物化学方法,利用内切糖苷酶PNGaseF和Endow酶切处理脂肪酶r27RCLC,SDS-PAGE和Western Blot,结果显示r27RCLC未发生糖基化.将样品r27RCLC通过胰蛋白酶酶解等步骤处理,进行MADLI-TOF-MS质谱分析,结果发现MADLI-TOF-MS鉴定结果与内切糖苷酶酶切处理结果一致,进一步证明毕赤酵母分泌表达的华根霉脂肪酶r27RCLC未发生糖基化.
研究瞭畢赤酵母GS115中能夠高效分泌錶達的華根黴脂肪酶(r27RCLC)的糖基化情況.運用糖基化抑製劑衣黴素處理錶達目的蛋白的畢赤酵母細胞,通過SDS-PAGE比較分析經衣黴素處理後的脂肪酶r27RCLC分泌錶達量的變化,結果顯示酶的分泌錶達受到很大的抑製,說明脂肪酶r27RCLC在錶達時候很可能髮生瞭糖基化,且糖基化對其有重要影響.通過生物化學方法,利用內切糖苷酶PNGaseF和Endow酶切處理脂肪酶r27RCLC,SDS-PAGE和Western Blot,結果顯示r27RCLC未髮生糖基化.將樣品r27RCLC通過胰蛋白酶酶解等步驟處理,進行MADLI-TOF-MS質譜分析,結果髮現MADLI-TOF-MS鑒定結果與內切糖苷酶酶切處理結果一緻,進一步證明畢赤酵母分泌錶達的華根黴脂肪酶r27RCLC未髮生糖基化.
연구료필적효모GS115중능구고효분비표체적화근매지방매(r27RCLC)적당기화정황.운용당기화억제제의매소처리표체목적단백적필적효모세포,통과SDS-PAGE비교분석경의매소처리후적지방매r27RCLC분비표체량적변화,결과현시매적분비표체수도흔대적억제,설명지방매r27RCLC재표체시후흔가능발생료당기화,차당기화대기유중요영향.통과생물화학방법,이용내절당감매PNGaseF화Endow매절처리지방매r27RCLC,SDS-PAGE화Western Blot,결과현시r27RCLC미발생당기화.장양품r27RCLC통과이단백매매해등보취처리,진행MADLI-TOF-MS질보분석,결과발현MADLI-TOF-MS감정결과여내절당감매매절처리결과일치,진일보증명필적효모분비표체적화근매지방매r27RCLC미발생당기화.
