CAJ | 학술논문

本研究旨在构建小鼠血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的逆转录病毒载体,通过转染建立稳定高表达VCAM-1的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨VCAM-1基因过表达对MSC免疫学特性的影响.以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入PMSCVmigr-1逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒表达质粒PMSCVmigr-1-mVCAM-1,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术转染293细胞,收获含有病毒颗粒的上清;用病毒上清感染间充质干细胞系(C3H10T 1/2)并检测其表达.采用3H-TdR掺入法测定高表达VCAM-1的MSC在淋巴母细胞转化实验中对淋巴细胞增殖的抑制作用.结果表明:酶切和测序鉴定证实,正确构建了小鼠VCAM-1的重组逆转录病毒表达质粒.逆转录病毒上清感染MSC后流式细胞术检测到目的基因VCAM-1在MSC表面高表达.高表达VCAM-1的MSC对刀豆素A诱导的淋巴细胞增殖具有显著抑制作用,且呈剂量效应关系.结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的重组逆转录病毒质粒并使其在MSC中稳定高表达.高表达VCAM-1的MSC对体外淋巴细胞增殖具有很强的抑制效果.本课题为进一步研究VCAM-1基因调控MSC干预免疫相关性疾病奠定了实验基础.
본연구지재구건소서혈관세포점부분자-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)적역전록병독재체,통과전염건립은정고표체VCAM-1적간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSC),병초보탐토VCAM-1기인과표체대MSC면역학특성적영향.이소서비장조직총RNA위모판,통과RT-PCR확증소서VCAM-1기인cDNA,응용기인공정기술장확증적cDNA편단삽입PMSCVmigr-1역전록병독재체,구건중조역전록병독표체질립PMSCVmigr-1-mVCAM-1,경한제성내절매매절분석급측서감정후,용지질체전염기술전염293세포,수획함유병독과립적상청;용병독상청감염간충질간세포계(C3H10T 1/2)병검측기표체.채용3H-TdR참입법측정고표체VCAM-1적MSC재림파모세포전화실험중대림파세포증식적억제작용.결과표명:매절화측서감정증실,정학구건료소서VCAM-1적중조역전록병독표체질립.역전록병독상청감염MSC후류식세포술검측도목적기인VCAM-1재MSC표면고표체.고표체VCAM-1적MSC대도두소A유도적림파세포증식구유현저억제작용,차정제량효응관계.결론:성공구건료소서VCAM-1기인적중조역전록병독질립병사기재MSC중은정고표체.고표체VCAM-1적MSC대체외림파세포증식구유흔강적억제효과.본과제위진일보연구VCAM-1기인조공MSC간예면역상관성질병전정료실험기출.