高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2014年
10期
2109-2113
,共5页
郭笑%于扬%陈龙%王铭铄%金梦梦%刘广娜%张黎%李涛%高壮
郭笑%于颺%陳龍%王銘鑠%金夢夢%劉廣娜%張黎%李濤%高壯
곽소%우양%진룡%왕명삭%금몽몽%류엄나%장려%리도%고장
快速定点突变%谷胱甘肽过氧化物酶%人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶
快速定點突變%穀胱甘肽過氧化物酶%人Zeta型穀胱甘肽硫轉移酶
쾌속정점돌변%곡광감태과양화물매%인Zeta형곡광감태류전이매
Site-directed mutagenesis%Glutathione peroxidase%Human glutathione transferase zeta
先将人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶1c-1c(hGSTZ1c-1c)中非催化中心的Cys-137,Cys-154,Cys-165和Cys-205突变为Ser,然后将催化中心14,15和17位的3个氨基酸残基突变为Cys,再利用半胱氨酸缺陷型大肠杆菌表达系统将其特定地转化为Sec,即把GPx的催化基团引入到hGSTZ1c-1c中,高效地获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的模拟酶.其中制备的3个含硒突变体15C,14C/15C和17C均显示出明显的GPx活力.对非含硒突变体性质研究发现,Ser-14或Ser-15任何一个残基发生突变都会导致hGSTZ1c-1c的GST活力几乎丧失,表明Ser-14和Ser-15在催化反应中发挥着重要作用,但前者主要参与底物结合,后者更侧重于催化.
先將人Zeta型穀胱甘肽硫轉移酶1c-1c(hGSTZ1c-1c)中非催化中心的Cys-137,Cys-154,Cys-165和Cys-205突變為Ser,然後將催化中心14,15和17位的3箇氨基痠殘基突變為Cys,再利用半胱氨痠缺陷型大腸桿菌錶達繫統將其特定地轉化為Sec,即把GPx的催化基糰引入到hGSTZ1c-1c中,高效地穫得瞭具有穀胱甘肽過氧化物酶(GPx)活力的模擬酶.其中製備的3箇含硒突變體15C,14C/15C和17C均顯示齣明顯的GPx活力.對非含硒突變體性質研究髮現,Ser-14或Ser-15任何一箇殘基髮生突變都會導緻hGSTZ1c-1c的GST活力幾乎喪失,錶明Ser-14和Ser-15在催化反應中髮揮著重要作用,但前者主要參與底物結閤,後者更側重于催化.
선장인Zeta형곡광감태류전이매1c-1c(hGSTZ1c-1c)중비최화중심적Cys-137,Cys-154,Cys-165화Cys-205돌변위Ser,연후장최화중심14,15화17위적3개안기산잔기돌변위Cys,재이용반광안산결함형대장간균표체계통장기특정지전화위Sec,즉파GPx적최화기단인입도hGSTZ1c-1c중,고효지획득료구유곡광감태과양화물매(GPx)활력적모의매.기중제비적3개함서돌변체15C,14C/15C화17C균현시출명현적GPx활력.대비함서돌변체성질연구발현,Ser-14혹Ser-15임하일개잔기발생돌변도회도치hGSTZ1c-1c적GST활력궤호상실,표명Ser-14화Ser-15재최화반응중발휘착중요작용,단전자주요삼여저물결합,후자경측중우최화.
