解放军医学院学报
解放軍醫學院學報
해방군의학원학보
Academic Journal of Chinese Pla Medical School
2014年
11期
1141-1146
,共6页
庄培袁%吕刚%范仲凯%李永明%张玉强%贾志强
莊培袁%呂剛%範仲凱%李永明%張玉彊%賈誌彊
장배원%려강%범중개%리영명%장옥강%가지강
骨髓间充质干细胞%神经营养因子β%低氧诱导因子-1α%基因转染%轴突再生
骨髓間充質榦細胞%神經營養因子β%低氧誘導因子-1α%基因轉染%軸突再生
골수간충질간세포%신경영양인자β%저양유도인자-1α%기인전염%축돌재생
bone marrow mesenchymal stem cells%nerve growth factor β%hypoxia inducible factor-1α%gene transfection%axonal regeneration
目的 观察神经生长因子β (nerve growth factor β,NGF β)/低氧诱导因子-1 d(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)双重转染的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对神经元轴突再生微环境的改善作用,为完善微环境中轴突再生的理论提供资料.方法 分别构建携带编码NGFβ、HIF-1α的慢病毒载体,用最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)转染BMSCs后,Western blot检测转染后的BMSCs表达NGF β、HIF-1α的情况.培养SD大鼠皮质神经元并将其与转染后的BMSCs用Transwell双层培养板构建共培养体系.将共培养体系在厌氧培养罐中培养48 h后,用ELISA方法检测神经元培养上清液中NGF β、HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,并用Image pro-Plus软件测量神经元轴突的长度.实验分组:A组:单独培养神经元;B组:BMSCs与神经元共培养;C组:NGF β转染的BMSCs与神经元共培养;D组:HIF-1 α转染的BMSCs与神经元共培养;E组:NGFβ/HIF-1α双重转染的BMSCs与神经元共培养.结果 Le-RFP-NGFβ和Le-GFP-HIF-1 α基因转染BMSCs转染率分别为84.83％和89.63％.Western blot检测显示,转染后的BMSCs能表达目的蛋白NGFβ和HIF-1α.共培养体系ELISA检测结果显示,C组和E组的NGFβ的表达量明显高于A、B组(P＜0.05);D组和E组的HIF-1α的表达量明显高于A、B组(P＜0.05).D、E两组的VEGF表达量高于A、B两组(P＜0.05).Image pro-Plus测量神经元轴突长度结果显示,C、D、E组大于A、B两组(P＜0.05),E组大于C、D组(P＜0.05).结论 与NGF β/HIF-1α双重转染BMSCs共培养的神经元轴突生长情况良好,在共培养环境中对神经元存活发挥重要作用的NGFβ、HIF-1α、VEGF等因子高表达.
目的 觀察神經生長因子β (nerve growth factor β,NGF β)/低氧誘導因子-1 d(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)雙重轉染的骨髓間充質榦細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)對神經元軸突再生微環境的改善作用,為完善微環境中軸突再生的理論提供資料.方法 分彆構建攜帶編碼NGFβ、HIF-1α的慢病毒載體,用最佳感染複數(multiplicity of infection,MOI)轉染BMSCs後,Western blot檢測轉染後的BMSCs錶達NGF β、HIF-1α的情況.培養SD大鼠皮質神經元併將其與轉染後的BMSCs用Transwell雙層培養闆構建共培養體繫.將共培養體繫在厭氧培養罐中培養48 h後,用ELISA方法檢測神經元培養上清液中NGF β、HIF-1α、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的錶達水平,併用Image pro-Plus軟件測量神經元軸突的長度.實驗分組:A組:單獨培養神經元;B組:BMSCs與神經元共培養;C組:NGF β轉染的BMSCs與神經元共培養;D組:HIF-1 α轉染的BMSCs與神經元共培養;E組:NGFβ/HIF-1α雙重轉染的BMSCs與神經元共培養.結果 Le-RFP-NGFβ和Le-GFP-HIF-1 α基因轉染BMSCs轉染率分彆為84.83％和89.63％.Western blot檢測顯示,轉染後的BMSCs能錶達目的蛋白NGFβ和HIF-1α.共培養體繫ELISA檢測結果顯示,C組和E組的NGFβ的錶達量明顯高于A、B組(P＜0.05);D組和E組的HIF-1α的錶達量明顯高于A、B組(P＜0.05).D、E兩組的VEGF錶達量高于A、B兩組(P＜0.05).Image pro-Plus測量神經元軸突長度結果顯示,C、D、E組大于A、B兩組(P＜0.05),E組大于C、D組(P＜0.05).結論 與NGF β/HIF-1α雙重轉染BMSCs共培養的神經元軸突生長情況良好,在共培養環境中對神經元存活髮揮重要作用的NGFβ、HIF-1α、VEGF等因子高錶達.
목적 관찰신경생장인자β (nerve growth factor β,NGF β)/저양유도인자-1 d(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)쌍중전염적골수간충질간세포(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)대신경원축돌재생미배경적개선작용,위완선미배경중축돌재생적이론제공자료.방법 분별구건휴대편마NGFβ、HIF-1α적만병독재체,용최가감염복수(multiplicity of infection,MOI)전염BMSCs후,Western blot검측전염후적BMSCs표체NGF β、HIF-1α적정황.배양SD대서피질신경원병장기여전염후적BMSCs용Transwell쌍층배양판구건공배양체계.장공배양체계재염양배양관중배양48 h후,용ELISA방법검측신경원배양상청액중NGF β、HIF-1α、혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)적표체수평,병용Image pro-Plus연건측량신경원축돌적장도.실험분조:A조:단독배양신경원;B조:BMSCs여신경원공배양;C조:NGF β전염적BMSCs여신경원공배양;D조:HIF-1 α전염적BMSCs여신경원공배양;E조:NGFβ/HIF-1α쌍중전염적BMSCs여신경원공배양.결과 Le-RFP-NGFβ화Le-GFP-HIF-1 α기인전염BMSCs전염솔분별위84.83％화89.63％.Western blot검측현시,전염후적BMSCs능표체목적단백NGFβ화HIF-1α.공배양체계ELISA검측결과현시,C조화E조적NGFβ적표체량명현고우A、B조(P＜0.05);D조화E조적HIF-1α적표체량명현고우A、B조(P＜0.05).D、E량조적VEGF표체량고우A、B량조(P＜0.05).Image pro-Plus측량신경원축돌장도결과현시,C、D、E조대우A、B량조(P＜0.05),E조대우C、D조(P＜0.05).결론 여NGF β/HIF-1α쌍중전염BMSCs공배양적신경원축돌생장정황량호,재공배양배경중대신경원존활발휘중요작용적NGFβ、HIF-1α、VEGF등인자고표체.
