中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
11期
877-880
,共4页
徐卫松%刘中原%程慧芳%王亚宾%付彤%魏战勇
徐衛鬆%劉中原%程慧芳%王亞賓%付彤%魏戰勇
서위송%류중원%정혜방%왕아빈%부동%위전용
链球菌%SYBR Green Ⅰ%荧光定量PCR%EF-Tu基因
鏈毬菌%SYBR Green Ⅰ%熒光定量PCR%EF-Tu基因
련구균%SYBR Green Ⅰ%형광정량PCR%EF-Tu기인
Streptococcus%SYBR Green Ⅰ%real-time PCR%EF-Tu gene
为建立链球茵的快速定量检测方法,本研究根据链球菌延伸因子EF-Tu基因保守序列设计一对引物,以链球菌DNA为模板通过PCR扩增其197 bp的EF-Tu基因片段,并克隆至pMD18-T载体中.以纯化的重组质粒为标准品建立标准曲线,建立了链球菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果显示在3.98×106拷贝/mL～3.98×102拷贝/μL范围内具有较好的线性关系,相关系数为R2=0.995,最低检出量为39.8拷贝/μL.此外,该方法具有良好的特异性,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌等其他细菌的检测结果均为阴性.重复性试验表明,该方法的组内和组间变异系数均低于1.0％.利用该方法对34份疑似链球菌感染病料进行检测,结果显示本研究所建立的方法对链球菌的检出率比常规PCR高14.7％,比细菌分离鉴定方法高29.4％.表明该方法可以用于对链球菌感染的定量研究和流行病学调查.
為建立鏈毬茵的快速定量檢測方法,本研究根據鏈毬菌延伸因子EF-Tu基因保守序列設計一對引物,以鏈毬菌DNA為模闆通過PCR擴增其197 bp的EF-Tu基因片段,併剋隆至pMD18-T載體中.以純化的重組質粒為標準品建立標準麯線,建立瞭鏈毬菌SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法.結果顯示在3.98×106拷貝/mL～3.98×102拷貝/μL範圍內具有較好的線性關繫,相關繫數為R2=0.995,最低檢齣量為39.8拷貝/μL.此外,該方法具有良好的特異性,對大腸桿菌、金黃色葡萄毬菌、變形桿菌等其他細菌的檢測結果均為陰性.重複性試驗錶明,該方法的組內和組間變異繫數均低于1.0％.利用該方法對34份疑似鏈毬菌感染病料進行檢測,結果顯示本研究所建立的方法對鏈毬菌的檢齣率比常規PCR高14.7％,比細菌分離鑒定方法高29.4％.錶明該方法可以用于對鏈毬菌感染的定量研究和流行病學調查.
위건립련구인적쾌속정량검측방법,본연구근거련구균연신인자EF-Tu기인보수서렬설계일대인물,이련구균DNA위모판통과PCR확증기197 bp적EF-Tu기인편단,병극륭지pMD18-T재체중.이순화적중조질립위표준품건립표준곡선,건립료련구균SYBR Green Ⅰ형광정량PCR검측방법.결과현시재3.98×106고패/mL～3.98×102고패/μL범위내구유교호적선성관계,상관계수위R2=0.995,최저검출량위39.8고패/μL.차외,해방법구유량호적특이성,대대장간균、금황색포도구균、변형간균등기타세균적검측결과균위음성.중복성시험표명,해방법적조내화조간변이계수균저우1.0％.이용해방법대34빈의사련구균감염병료진행검측,결과현시본연구소건립적방법대련구균적검출솔비상규PCR고14.7％,비세균분리감정방법고29.4％.표명해방법가이용우대련구균감염적정량연구화류행병학조사.
