中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
11期
872-876
,共5页
杨莘%周艳君%单同领%姜一峰%童武%童光志
楊莘%週豔君%單同領%薑一峰%童武%童光誌
양신%주염군%단동령%강일봉%동무%동광지
猪繁殖与呼吸综合征病毒%strand-specific荧光定量RT-PCR%不同链RNA
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%strand-specific熒光定量RT-PCR%不同鏈RNA
저번식여호흡종합정병독%strand-specific형광정량RT-PCR%불동련RNA
porcine reproductive and respiratory syndrome virus%strand-specific real-time RT-PCR%different types of RNA
为了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制和转录机制,准确定量其在复制过程中基因组不同类型RNA (vRNA和cRNA)的含量,本研究根据PRRSV基因组Nsp12基因设计含有链特异性标签的特异性引物,建立了一种针对病毒基因组不同链RNA的strand-specific荧光定量RT-PCR方法.结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线在101拷贝/μL～107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,对vRNA和cRNA的检测下限为7.40拷贝/μL和6.52拷贝/μL,能够特异性的区分病毒复制过程中产生的vRNA链和cRNA链,具有很高的特异性、灵敏性和重复性.HP-PRRSV感染MARC-145细胞后不同时间段检测vRNA和cRNA含量显示,病毒不同链RNA含量在感染过程中持续增加,vRNA和cRNA含量在感染后24 h约为7.0×107拷贝/μL和7.2×106拷贝/μL.本研究建立的方法可以用于区分和定量PRRSV在复制过程中产生的不同链RNA,为研究病毒的复制和致病机理提供了一种有效的检测手段.
為瞭解高緻病性豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)的複製和轉錄機製,準確定量其在複製過程中基因組不同類型RNA (vRNA和cRNA)的含量,本研究根據PRRSV基因組Nsp12基因設計含有鏈特異性標籤的特異性引物,建立瞭一種針對病毒基因組不同鏈RNA的strand-specific熒光定量RT-PCR方法.結果錶明,以重組質粒標準品構建的標準麯線在101拷貝/μL～107拷貝/μL範圍內具有良好的線性關繫,對vRNA和cRNA的檢測下限為7.40拷貝/μL和6.52拷貝/μL,能夠特異性的區分病毒複製過程中產生的vRNA鏈和cRNA鏈,具有很高的特異性、靈敏性和重複性.HP-PRRSV感染MARC-145細胞後不同時間段檢測vRNA和cRNA含量顯示,病毒不同鏈RNA含量在感染過程中持續增加,vRNA和cRNA含量在感染後24 h約為7.0×107拷貝/μL和7.2×106拷貝/μL.本研究建立的方法可以用于區分和定量PRRSV在複製過程中產生的不同鏈RNA,為研究病毒的複製和緻病機理提供瞭一種有效的檢測手段.
위료해고치병성저번식여호흡종합정병독(PRRSV)적복제화전록궤제,준학정량기재복제과정중기인조불동류형RNA (vRNA화cRNA)적함량,본연구근거PRRSV기인조Nsp12기인설계함유련특이성표첨적특이성인물,건립료일충침대병독기인조불동련RNA적strand-specific형광정량RT-PCR방법.결과표명,이중조질립표준품구건적표준곡선재101고패/μL～107고패/μL범위내구유량호적선성관계,대vRNA화cRNA적검측하한위7.40고패/μL화6.52고패/μL,능구특이성적구분병독복제과정중산생적vRNA련화cRNA련,구유흔고적특이성、령민성화중복성.HP-PRRSV감염MARC-145세포후불동시간단검측vRNA화cRNA함량현시,병독불동련RNA함량재감염과정중지속증가,vRNA화cRNA함량재감염후24 h약위7.0×107고패/μL화7.2×106고패/μL.본연구건립적방법가이용우구분화정량PRRSV재복제과정중산생적불동련RNA,위연구병독적복제화치병궤리제공료일충유효적검측수단.
