中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
11期
829-833
,共5页
李继东%朱学亮%李辉%骆学农%窦永喜%才学鹏
李繼東%硃學亮%李輝%駱學農%竇永喜%纔學鵬
리계동%주학량%리휘%락학농%두영희%재학붕
山羊痘病毒%羊口疮病毒%启动子%p7.5%p11
山羊痘病毒%羊口瘡病毒%啟動子%p7.5%p11
산양두병독%양구창병독%계동자%p7.5%p11
goat pox virus%Orf virus%promoter%p7.5%p11
为验证痘苗病毒启动子p7.5/p11在山羊痘病毒(GPV)和羊口疮病毒(ORFV)中的启动功能,本研究通过pTKpp质粒以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,构建含有p7.5/p 11-GFP表达盒的重组质粒pTKp-gpt-i-GFP-p和pTKpp-H-i-GFP,将其利用脂质体转染预感染GPV或ORFV的羔羊睾丸(LT)细胞中.结果显示,两种重组质粒转染LT细胞24 h后均可以检测到绿色荧光,表明p7.5/p11均能够有效的启动目的蛋白的瞬时表达.同时,构建用于GPV重组的通用转移载体pTKfpgigp,将含有小反刍兽疫病毒(PPRV)的F基因的重组质粒pTKfpgigp-F与GPV共转染LT细胞,经同源重组制备表达PPRV F基因的重组GPV(rGPV).结果显示,rGPV在感染的LT细胞中F基因能够稳定表达.结果证明,痘苗病毒启动子p7.5和p11均能够被GPV或ORFV编码的RNA聚合酶所识别,从而启动外源目的基因的表达.因此,p7.5和p11可以用于表达外源基因的GPV或ORFV重组病毒的构建.
為驗證痘苗病毒啟動子p7.5/p11在山羊痘病毒(GPV)和羊口瘡病毒(ORFV)中的啟動功能,本研究通過pTKpp質粒以綠色熒光蛋白(GFP)為報告基因,構建含有p7.5/p 11-GFP錶達盒的重組質粒pTKp-gpt-i-GFP-p和pTKpp-H-i-GFP,將其利用脂質體轉染預感染GPV或ORFV的羔羊睪汍(LT)細胞中.結果顯示,兩種重組質粒轉染LT細胞24 h後均可以檢測到綠色熒光,錶明p7.5/p11均能夠有效的啟動目的蛋白的瞬時錶達.同時,構建用于GPV重組的通用轉移載體pTKfpgigp,將含有小反芻獸疫病毒(PPRV)的F基因的重組質粒pTKfpgigp-F與GPV共轉染LT細胞,經同源重組製備錶達PPRV F基因的重組GPV(rGPV).結果顯示,rGPV在感染的LT細胞中F基因能夠穩定錶達.結果證明,痘苗病毒啟動子p7.5和p11均能夠被GPV或ORFV編碼的RNA聚閤酶所識彆,從而啟動外源目的基因的錶達.因此,p7.5和p11可以用于錶達外源基因的GPV或ORFV重組病毒的構建.
위험증두묘병독계동자p7.5/p11재산양두병독(GPV)화양구창병독(ORFV)중적계동공능,본연구통과pTKpp질립이록색형광단백(GFP)위보고기인,구건함유p7.5/p 11-GFP표체합적중조질립pTKp-gpt-i-GFP-p화pTKpp-H-i-GFP,장기이용지질체전염예감염GPV혹ORFV적고양고환(LT)세포중.결과현시,량충중조질립전염LT세포24 h후균가이검측도록색형광,표명p7.5/p11균능구유효적계동목적단백적순시표체.동시,구건용우GPV중조적통용전이재체pTKfpgigp,장함유소반추수역병독(PPRV)적F기인적중조질립pTKfpgigp-F여GPV공전염LT세포,경동원중조제비표체PPRV F기인적중조GPV(rGPV).결과현시,rGPV재감염적LT세포중F기인능구은정표체.결과증명,두묘병독계동자p7.5화p11균능구피GPV혹ORFV편마적RNA취합매소식별,종이계동외원목적기인적표체.인차,p7.5화p11가이용우표체외원기인적GPV혹ORFV중조병독적구건.
