广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
21期
144-148
,共5页
余波%罗永成%徐景峨%周思旋%杨莉%马永兵
餘波%囉永成%徐景峨%週思鏇%楊莉%馬永兵
여파%라영성%서경아%주사선%양리%마영병
大鲵%柱状黄杆菌%荧光定量PCR%16S rRNA基因
大鯢%柱狀黃桿菌%熒光定量PCR%16S rRNA基因
대예%주상황간균%형광정량PCR%16S rRNA기인
根据GenBank中柱状黄杆菌16S rRNA序列,设计1对特异性引物,PCR扩增获得16S rRNA基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了黄杆菌的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、迟缓爱德华、弗氏柠檬酸杆菌均无阳性信号扩增,重复性好,灵敏度可达12拷贝/μL.结果表明,研制的柱状黄杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等特征,适合于大鲵临床样品的检测.
根據GenBank中柱狀黃桿菌16S rRNA序列,設計1對特異性引物,PCR擴增穫得16S rRNA基因片段,併剋隆到pMD-18T載體上作為暘性標準品.通過對SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR反應條件的優化,建立瞭黃桿菌的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR診斷方法,以此為基礎研製試劑盒.試劑盒擴增產物的鎔解麯線分析隻齣現1箇單特異峰,無引物二聚體,對嗜水氣單胞菌、熒光假單胞菌、遲緩愛德華、弗氏檸檬痠桿菌均無暘性信號擴增,重複性好,靈敏度可達12拷貝/μL.結果錶明,研製的柱狀黃桿菌SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR試劑盒具有特異、靈敏、快速、重複性好等特徵,適閤于大鯢臨床樣品的檢測.
근거GenBank중주상황간균16S rRNA서렬,설계1대특이성인물,PCR확증획득16S rRNA기인편단,병극륭도pMD-18T재체상작위양성표준품.통과대SYBR Green Ⅰ형광정량PCR반응조건적우화,건립료황간균적SYBR Green Ⅰ형광정량PCR진단방법,이차위기출연제시제합.시제합확증산물적용해곡선분석지출현1개단특이봉,무인물이취체,대기수기단포균、형광가단포균、지완애덕화、불씨저몽산간균균무양성신호확증,중복성호,령민도가체12고패/μL.결과표명,연제적주상황간균SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR시제합구유특이、령민、쾌속、중복성호등특정,괄합우대예림상양품적검측.
