重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2014年
33期
4447-4449,4453
,共4页
邓飞鸿%聂飚%左俊华%柳雪花%陈金敏
鄧飛鴻%聶飚%左俊華%柳雪花%陳金敏
산비홍%섭표%좌준화%류설화%진금민
受体,表皮生长因子%大肠肿瘤%肝细胞生长因子K1%腺相关病毒
受體,錶皮生長因子%大腸腫瘤%肝細胞生長因子K1%腺相關病毒
수체,표피생장인자%대장종류%간세포생장인자K1%선상관병독
receptor,epidermal growth factor receptor%colorectol neoplasms%hepatocyte growth factor K1%adeno associated virus
目的：研究腺相关病毒‐肝细胞生长因子K1（AAV‐HGFK1）对KRAS、BRAF野生型和突变型大肠癌细胞株的生长影响。方法选择人源的细胞株 KRAS和BRAF野生的SW48，KRAS突变的 Lovo ，KRAS突变且不表达表皮生长因子受体（EGFR）的SW620，BRAF突变的HT29，实时荧光定量PCR（RT‐PCR）测定EGFR基因转录水平，分别用5×104 vg/细胞的腺相关病毒（AAV）感染以上细胞株，荧光显微镜和流式细胞仪测定AAV‐EGFP感染率。加入或不加表皮生长因子（EGF）的情况下，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EGFR、磷酸化EGFR（p‐EGFR）和β‐actin ，四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测细胞增殖。结果Lovo和 HT29高表达EGFR ，而SW48表达EGFR较低，加入EGF促进了以上3种细胞的 EGFR磷酸化，AAV‐HGFK1抑制EGFR磷酸化，从而显著降低其增殖。EGF对SW620增殖无显著影响，但AAV‐HGFK1感染抑制了胎牛血清培养的SW620细胞。结论 AAV‐HGFK1可能直接作用于EGFR ，抑制其磷酸化从而阻断EGF促进细胞增殖，并可能通过其他通路对KRAS或BRA F基因野生或突变的大肠癌细胞都有抑制作用。
目的：研究腺相關病毒‐肝細胞生長因子K1（AAV‐HGFK1）對KRAS、BRAF野生型和突變型大腸癌細胞株的生長影響。方法選擇人源的細胞株 KRAS和BRAF野生的SW48，KRAS突變的 Lovo ，KRAS突變且不錶達錶皮生長因子受體（EGFR）的SW620，BRAF突變的HT29，實時熒光定量PCR（RT‐PCR）測定EGFR基因轉錄水平，分彆用5×104 vg/細胞的腺相關病毒（AAV）感染以上細胞株，熒光顯微鏡和流式細胞儀測定AAV‐EGFP感染率。加入或不加錶皮生長因子（EGF）的情況下，蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測EGFR、燐痠化EGFR（p‐EGFR）和β‐actin ，四甲基偶氮唑鹽比色（MTT）法測細胞增殖。結果Lovo和 HT29高錶達EGFR ，而SW48錶達EGFR較低，加入EGF促進瞭以上3種細胞的 EGFR燐痠化，AAV‐HGFK1抑製EGFR燐痠化，從而顯著降低其增殖。EGF對SW620增殖無顯著影響，但AAV‐HGFK1感染抑製瞭胎牛血清培養的SW620細胞。結論 AAV‐HGFK1可能直接作用于EGFR ，抑製其燐痠化從而阻斷EGF促進細胞增殖，併可能通過其他通路對KRAS或BRA F基因野生或突變的大腸癌細胞都有抑製作用。
목적：연구선상관병독‐간세포생장인자K1（AAV‐HGFK1）대KRAS、BRAF야생형화돌변형대장암세포주적생장영향。방법선택인원적세포주 KRAS화BRAF야생적SW48，KRAS돌변적 Lovo ，KRAS돌변차불표체표피생장인자수체（EGFR）적SW620，BRAF돌변적HT29，실시형광정량PCR（RT‐PCR）측정EGFR기인전록수평，분별용5×104 vg/세포적선상관병독（AAV）감염이상세포주，형광현미경화류식세포의측정AAV‐EGFP감염솔。가입혹불가표피생장인자（EGF）적정황하，단백면역인적법（Western blot）검측EGFR、린산화EGFR（p‐EGFR）화β‐actin ，사갑기우담서염비색（MTT）법측세포증식。결과Lovo화 HT29고표체EGFR ，이SW48표체EGFR교저，가입EGF촉진료이상3충세포적 EGFR린산화，AAV‐HGFK1억제EGFR린산화，종이현저강저기증식。EGF대SW620증식무현저영향，단AAV‐HGFK1감염억제료태우혈청배양적SW620세포。결론 AAV‐HGFK1가능직접작용우EGFR ，억제기린산화종이조단EGF촉진세포증식，병가능통과기타통로대KRAS혹BRA F기인야생혹돌변적대장암세포도유억제작용。
Objective To study the effect of adeno associated virus hepatocyte growth factor K1(AAV‐HGFK1)on the prolifer‐ation of 4 different colorectal cell lines with or without KRAS or BRAF mutation .Methods The levels of epidermal growth factor receptor (EGFR) mRNA were determined in SW48 without KRAS or BRAF mutation ,Lovo with KRAS mutation ,SW620 with KRAS mutation ,HT29 with BRAF mutation by quantitative real time PCR ,respectively .After the infection of AAV‐HGFK1 ,the expressions of EGFR ,p‐EGFR and β‐actin were detected by Western blot and the proliferation of the cells were assayed using MTT .Results Lovo ,SW48 and HT29 expressed EGFR protein while SW620 did not .EGF promoted the proliferation of Lovo , SW48 and HT29 cells .AAV‐HGFK1 down‐regulated the phosphorylation of EGFR and significantly inhibited their proliferation . But EGF had no effect on proliferation of SW620 stimulated by EGF .Conclusion AAV‐HGFK1 exhibited its antitumor effects through EGF/EGFR signaling irrespective of the KRAS or BRAF mutation and may also act through other signaling pathways .
