中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2014年
6期
870-877
,共8页
李春杰%赵建%张世勇%潘微彤%蒲韵竹%贾启燕%查晓丹%尚艳楠%黄春倩%刘艳琴%钟玉绪%李前%丁日高%付爱玲%赵宝全
李春傑%趙建%張世勇%潘微彤%蒲韻竹%賈啟燕%查曉丹%尚豔楠%黃春倩%劉豔琴%鐘玉緒%李前%丁日高%付愛玲%趙寶全
리춘걸%조건%장세용%반미동%포운죽%가계연%사효단%상염남%황춘천%류염금%종옥서%리전%정일고%부애령%조보전
细胞色素P450 CYP3A65%斑马鱼,转基因%铜%镉%锌%多氯联苯化合物
細胞色素P450 CYP3A65%斑馬魚,轉基因%銅%鎘%鋅%多氯聯苯化閤物
세포색소P450 CYP3A65%반마어,전기인%동%력%자%다록련분화합물
cytochrome P-450 CYP3A65%zebrafish,transgenic%copper%cadmium%zinc%polychlorinated biphenyls
目的：建立细胞色素P450CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼用于快速、直观检测重金属(铜、镉、锌)及类二噁英化合物五氯联苯( PCB126)等环境污染物。方法 PCR方法钓取斑马鱼CYP3A65基因调控序列，构建于pT2AL200R150G转座载体克隆位点，将pTol2-CYP3A65-EGFP 质粒与pCS-TP 转座酶mRNA共同注射入斑马鱼胚胎单细胞，通过荧光筛选，遗传选育和建立荧光标记转基因斑马鱼品系 Tg ( CYP3A65-EGFP)；利用该转基因斑马鱼胚胎及幼鱼检测上述3种重金属及 PCB126的生物学响应。结果成功建立了CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼品系，绿色荧光在肝和消化道表达；该转基因斑马鱼对3种重金属及PCB126产生生物学响应。染毒96 h后，铜0.1和0.2μmol·L－1、镉0.35和0.7μmol·L－1组、锌1.5和3μmol·L－1组、PCB126所有浓度组荧光相对表达量显著增强( P<0.01)；铜0.9μmol·L－1组、镉2.7和5.4μmol·L－1组及锌24μmol·L－1组荧光相对表达量显著减弱( P<0.01)；染毒168 h 后，铜0.1和0.2μmol·L－1组、镉0.35和0.7μmol·L－1组、锌1.5和3μmol·L－1组及PCB1262~32μmol·L－1浓度组荧光相对表达量显著增强( P<0.01)，铜0.9μmol·L－1组、镉2.7和5.4μmol·L－1组、锌12和24μmol·L－1组荧光相对表达量减弱( P<0.05)，随着浓度增加荧光减弱，呈现出量效关系。结论 CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼模型可以用来检测铜、镉、锌及PCB126等环境污染物。
目的：建立細胞色素P450CYP3A65熒光標記轉基因斑馬魚用于快速、直觀檢測重金屬(銅、鎘、鋅)及類二噁英化閤物五氯聯苯( PCB126)等環境汙染物。方法 PCR方法釣取斑馬魚CYP3A65基因調控序列，構建于pT2AL200R150G轉座載體剋隆位點，將pTol2-CYP3A65-EGFP 質粒與pCS-TP 轉座酶mRNA共同註射入斑馬魚胚胎單細胞，通過熒光篩選，遺傳選育和建立熒光標記轉基因斑馬魚品繫 Tg ( CYP3A65-EGFP)；利用該轉基因斑馬魚胚胎及幼魚檢測上述3種重金屬及 PCB126的生物學響應。結果成功建立瞭CYP3A65熒光標記轉基因斑馬魚品繫，綠色熒光在肝和消化道錶達；該轉基因斑馬魚對3種重金屬及PCB126產生生物學響應。染毒96 h後，銅0.1和0.2μmol·L－1、鎘0.35和0.7μmol·L－1組、鋅1.5和3μmol·L－1組、PCB126所有濃度組熒光相對錶達量顯著增彊( P<0.01)；銅0.9μmol·L－1組、鎘2.7和5.4μmol·L－1組及鋅24μmol·L－1組熒光相對錶達量顯著減弱( P<0.01)；染毒168 h 後，銅0.1和0.2μmol·L－1組、鎘0.35和0.7μmol·L－1組、鋅1.5和3μmol·L－1組及PCB1262~32μmol·L－1濃度組熒光相對錶達量顯著增彊( P<0.01)，銅0.9μmol·L－1組、鎘2.7和5.4μmol·L－1組、鋅12和24μmol·L－1組熒光相對錶達量減弱( P<0.05)，隨著濃度增加熒光減弱，呈現齣量效關繫。結論 CYP3A65熒光標記轉基因斑馬魚模型可以用來檢測銅、鎘、鋅及PCB126等環境汙染物。
목적：건립세포색소P450CYP3A65형광표기전기인반마어용우쾌속、직관검측중금속(동、력、자)급류이오영화합물오록련분( PCB126)등배경오염물。방법 PCR방법조취반마어CYP3A65기인조공서렬，구건우pT2AL200R150G전좌재체극륭위점，장pTol2-CYP3A65-EGFP 질립여pCS-TP 전좌매mRNA공동주사입반마어배태단세포，통과형광사선，유전선육화건립형광표기전기인반마어품계 Tg ( CYP3A65-EGFP)；이용해전기인반마어배태급유어검측상술3충중금속급 PCB126적생물학향응。결과성공건립료CYP3A65형광표기전기인반마어품계，록색형광재간화소화도표체；해전기인반마어대3충중금속급PCB126산생생물학향응。염독96 h후，동0.1화0.2μmol·L－1、력0.35화0.7μmol·L－1조、자1.5화3μmol·L－1조、PCB126소유농도조형광상대표체량현저증강( P<0.01)；동0.9μmol·L－1조、력2.7화5.4μmol·L－1조급자24μmol·L－1조형광상대표체량현저감약( P<0.01)；염독168 h 후，동0.1화0.2μmol·L－1조、력0.35화0.7μmol·L－1조、자1.5화3μmol·L－1조급PCB1262~32μmol·L－1농도조형광상대표체량현저증강( P<0.01)，동0.9μmol·L－1조、력2.7화5.4μmol·L－1조、자12화24μmol·L－1조형광상대표체량감약( P<0.05)，수착농도증가형광감약，정현출량효관계。결론 CYP3A65형광표기전기인반마어모형가이용래검측동、력、자급PCB126등배경오염물。
OBJECTlVE To establish Tg(-6.3CYP3A65∶EGFP) transgenic zebrafish for quick, intuitive detection of heavy metals ( copper, cadmium and zinc) , dioxin-like PCBs ( PCB126) and other environmental pollutants. METHODS Tol2 transposon system was used to generate transgenic zebrafish lines Tg(-6.3CYP3A65∶EGFP) in which CYP3A65 promoter regualated labeled fluorescence. The effect of heavy mentals ( copper, cadmium and zinc ) and PCB126 on the relative amounts of CYP3A65 gene expression was determined by observing the change in fluorescence intensity. RESULTS The relative gene expression of CYP3A65 was significantly increased after 96 h exposure to copper 0.1 and 0.2μmol·L-1 , cadmium 0.35 and 0.7μmol·L-1 , zinc 1.5 and 3μmol·L-1 , and PCB126 2-32μmol·L-1 , respectively ( P<0.01) , but decreased after 96 h exposure to copper 0. 9 μmol·L-1 , cadmium 2. 7 and 5.4 μmol·L-1 , and zinc 24μmol·L-1 , respectively( P<0.01) . CYP3A65 gene expression was significantly increased after 168 h exposure to copper 0.1 and 0.2 μmol·L-1 , cadmium 0.35 and 0.7 μmol·L-1 , zinc 1.5 and 3 μmol·L-1, and PCB126 2-32 μmol·L-1, respectively(P<0.01), but decreased after 168 h exposure to copper 0.9 μmol·L-1, cadmium 2.7 and 5.4 μmol·L-1, and zinc 12 and 24 μmol·L-1( P<0.05) , in a concentration-dependent manner. CONCLUSlON The results suggest that zebrafish CYP3A65 gene expression and the CYP3A65 labeled fluorescence lines can be another candidate biomarker for detecting environmental pollutants.
