中华病理学杂志
中華病理學雜誌
중화병이학잡지
Chinese Journal of Pathology
2014年
2期
103-108
,共6页
李江伟%李道明%张岚%黄培%李振乾
李江偉%李道明%張嵐%黃培%李振乾
리강위%리도명%장람%황배%리진건
甲状腺肿瘤%癌,髓样%细胞系,肿瘤%基质金属蛋白酶类
甲狀腺腫瘤%癌,髓樣%細胞繫,腫瘤%基質金屬蛋白酶類
갑상선종류%암,수양%세포계,종류%기질금속단백매류
Thyroid neoplasms%Carcinoma,medullary%Cell line,tumor%Matrix metalloproteinases
目的 探讨沉默CD147基因对人甲状腺髓样癌TT细胞ANXA2、基质金属蛋白酶(MMP)-2和组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-2蛋白表达和生物学特性的影响.方法 首先用免疫细胞化学技术检测CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TT细胞中的表达情况；应用RNA干扰(RNAi)技术筛选出能有效沉默TT细胞CD147基因的小干扰RNA(siRNA)序列和最佳时间点；在最佳时间点,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测ANXA2、MMP-2、TIMP-2等在mRNA和蛋白水平的表达情况；四甲基偶氮唑盐法检测CD147基因沉默后TT细胞的增殖情况；流式细胞技术检测CD147基因被沉默后各实验组TT细胞的周期和凋亡的改变；Transwell小室实验检测沉默CD147基因对TT细胞迁移和侵袭的影响.结果 CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TF细胞中均有不同程度的表达；筛选出2条能够在72 h时有效沉默TT细胞CD147基因表达的siRNA序列；MMP-2 mRNA和蛋白的相对表达量也同时下降；而ANXA2 mRNA和蛋白的相对表达量均无明显变化:TIMP-2 mRNA相对表达量无变化,但其蛋白的表达水平明显下降；沉默CD147基因后TT细胞的增殖受到抑制,Go/G1期细胞明显增加,G2/M期细胞比例明显下降,但各实验组凋亡细胞的比例没有变化；沉默TT细胞CD147基因后,Transwell小室迁移和侵袭实验中,各实验组的穿膜细胞数差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 通过RNAi技术,2条CD147 siRNA可以有效的沉默TT细胞CD147基因在mRNA和蛋白水平上的表达,同时下调MMP-2 mRNA和蛋白的表达,对TIMP-2 mRNA无明显影响,但是导致了TIMP-2蛋白表达下降,对ANXA2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响；沉默CD147基因可以抑制TT细胞的生长,改变其细胞周期,但是对TT细胞的凋亡、迁移和侵袭影响不大.
目的 探討沉默CD147基因對人甲狀腺髓樣癌TT細胞ANXA2、基質金屬蛋白酶(MMP)-2和組織金屬蛋白酶抑製因子(TIMP)-2蛋白錶達和生物學特性的影響.方法 首先用免疫細胞化學技術檢測CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TT細胞中的錶達情況；應用RNA榦擾(RNAi)技術篩選齣能有效沉默TT細胞CD147基因的小榦擾RNA(siRNA)序列和最佳時間點；在最佳時間點,用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)、Western blot分彆檢測ANXA2、MMP-2、TIMP-2等在mRNA和蛋白水平的錶達情況；四甲基偶氮唑鹽法檢測CD147基因沉默後TT細胞的增殖情況；流式細胞技術檢測CD147基因被沉默後各實驗組TT細胞的週期和凋亡的改變；Transwell小室實驗檢測沉默CD147基因對TT細胞遷移和侵襲的影響.結果 CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2等蛋白在TF細胞中均有不同程度的錶達；篩選齣2條能夠在72 h時有效沉默TT細胞CD147基因錶達的siRNA序列；MMP-2 mRNA和蛋白的相對錶達量也同時下降；而ANXA2 mRNA和蛋白的相對錶達量均無明顯變化:TIMP-2 mRNA相對錶達量無變化,但其蛋白的錶達水平明顯下降；沉默CD147基因後TT細胞的增殖受到抑製,Go/G1期細胞明顯增加,G2/M期細胞比例明顯下降,但各實驗組凋亡細胞的比例沒有變化；沉默TT細胞CD147基因後,Transwell小室遷移和侵襲實驗中,各實驗組的穿膜細胞數差異均無統計學意義(P＞0.05).結論 通過RNAi技術,2條CD147 siRNA可以有效的沉默TT細胞CD147基因在mRNA和蛋白水平上的錶達,同時下調MMP-2 mRNA和蛋白的錶達,對TIMP-2 mRNA無明顯影響,但是導緻瞭TIMP-2蛋白錶達下降,對ANXA2 mRNA和蛋白的錶達均無明顯影響；沉默CD147基因可以抑製TT細胞的生長,改變其細胞週期,但是對TT細胞的凋亡、遷移和侵襲影響不大.
목적 탐토침묵CD147기인대인갑상선수양암TT세포ANXA2、기질금속단백매(MMP)-2화조직금속단백매억제인자(TIMP)-2단백표체화생물학특성적영향.방법 수선용면역세포화학기술검측CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2등단백재TT세포중적표체정황；응용RNA간우(RNAi)기술사선출능유효침묵TT세포CD147기인적소간우RNA(siRNA)서렬화최가시간점；재최가시간점,용역전록-취합매련반응(RT-PCR)、Western blot분별검측ANXA2、MMP-2、TIMP-2등재mRNA화단백수평적표체정황；사갑기우담서염법검측CD147기인침묵후TT세포적증식정황；류식세포기술검측CD147기인피침묵후각실험조TT세포적주기화조망적개변；Transwell소실실험검측침묵CD147기인대TT세포천이화침습적영향.결과 CD147、ANXA2、MMP-2、TIMP-2등단백재TF세포중균유불동정도적표체；사선출2조능구재72 h시유효침묵TT세포CD147기인표체적siRNA서렬；MMP-2 mRNA화단백적상대표체량야동시하강；이ANXA2 mRNA화단백적상대표체량균무명현변화:TIMP-2 mRNA상대표체량무변화,단기단백적표체수평명현하강；침묵CD147기인후TT세포적증식수도억제,Go/G1기세포명현증가,G2/M기세포비례명현하강,단각실험조조망세포적비례몰유변화；침묵TT세포CD147기인후,Transwell소실천이화침습실험중,각실험조적천막세포수차이균무통계학의의(P＞0.05).결론 통과RNAi기술,2조CD147 siRNA가이유효적침묵TT세포CD147기인재mRNA화단백수평상적표체,동시하조MMP-2 mRNA화단백적표체,대TIMP-2 mRNA무명현영향,단시도치료TIMP-2단백표체하강,대ANXA2 mRNA화단백적표체균무명현영향；침묵CD147기인가이억제TT세포적생장,개변기세포주기,단시대TT세포적조망、천이화침습영향불대.
Objective To study the influence of CD147 gene silencing on the expression of ANXA2,MMP-2 and TIMP-2 of thyroid medullary carcinoma TT cells and related biological characteristics.Methods Protein expression of CD147,ANXA2,MMP-2 and TIMP-2 was detected by immunocytochemistry.RNAi technology was used to identify the specific siRNA sequences and the optimal time point of effective inhibition of CD147 gene.The expression of ANXA2,MMP-2 and TIMP-2 at mRNA and protein levels was detected with RT-PCR and Western blot,respectively.MTT method was used to detect the proliferation of the TT cells,flow cytometry (FCM) to detect the cell cycle and apoptosis changes of TT cells and transwell chamber assays to document the influence of CD147 gene silencing on migration and invasion of the TT cells.Results The protein expression of CD147,ANXA2,MMP-2 and TIMP-2 proteins was variable in the TT cells.Two siRNA sequences were identified to effectively silence CD147 gene in the TT cells,in which relative expression of MMP-2 was reduced at both mRNA and protein levels; although the expression of ANXA2 mRNA and protein did not change significantly.TIMP-2 protein expression markedly decreased in an absence of its mRNA expression.The proliferation of the TT cells was inhibited upon the CD147 gene silencing along with a significant increase of G0/G1 phase cells and a decrease of G2/M phase cells.However,the proportion of the apoptotic cells in all experimental groups did not change.The number of the penetrating cells through the membrane filters did not show significant changes in all experimental groups in the Transwell chamber assays.Conclusions Through RNAi technology,two CD147 siRNA sequences are identified and shown to effectively inhibit CD147 gene expression of the TT cells.CD147 gene silencing leads to growth inhibition of the TT cells and alteration of the cell cycle.However,silencing CD147 does not significantly affect the apoptosis,migration and invasion of the TT cells.
