中华泌尿外科杂志
中華泌尿外科雜誌
중화비뇨외과잡지
CHINESE JOURNAL OF UROLOGY
2013年
4期
263-267
,共5页
黎承杨%戚剑烽%王翔%陶芝伟%邓耀良
黎承楊%慼劍烽%王翔%陶芝偉%鄧耀良
려승양%척검봉%왕상%도지위%산요량
肾小管上皮细胞%草酸%一水草酸钙%氧化应激%牛磺酸
腎小管上皮細胞%草痠%一水草痠鈣%氧化應激%牛磺痠
신소관상피세포%초산%일수초산개%양화응격%우광산
Tubular epithelial cell%Oxalate%Calcium oxalate monohydrate%Oxidative stress%Taurine
目的 探讨牛磺酸在体外细胞培养中对草酸和草酸钙晶体诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 将体外培养的人远端肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组:第1组,单纯HK-2细胞;第2组,HK-2细胞中加入草酸和一水草酸钙(COM);第3组,HK-2细胞中加入草酸、COM和牛磺酸;第4组,HK-2细胞中加入草酸、COM和夹竹桃麻素;第5组,HK-2细胞中加入草酸、COM和过氧化氢酶.培养6h后收集各组细胞上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢(H2O2)、8-异前列腺素(8-IP)含量及单核细胞趋化蛋白质-1(MCP-1)蛋白水平,RT-PCR法检测细胞内MCP-1 mRNA、P47 phox mRNA表达水平;MTT法测定培养24 h后的细胞存活率.结果 培养24 h后MTT法检测第1组细胞的吸光度A值为0.996±0.044,第2组为0.626±0.011,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).培养6h后第1组细胞上清液H2O2、8-IP、LDH含量分别为(18.68±0.70) mmol/L、(12.72±1.69) ng/ml、(194.05±7.91) U/L,第2组分别为(53.27±1.88) mmol/L、(57.53±3.11)ng/ml、(484.34±29.44) U/L,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).第1组MCP-1蛋白水平为(17.32±2.32) pg/ml,第2组为(69.21±3.39) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).第1组与第2组细胞的MCP-1 mRNA、P47phox mRNA表达水平倍增比值分别为1/3.51和1/1.38,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).MTT法检测第3、4、5组细胞的吸光度A值分别为0.748±0.033、0.825±0.078、0.815 ±0.037,与第2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).第3、4、5组细胞上清液H2O2、8-IP、LDH含量均明显少于第2组.第3、4、5组细胞上清液MCP-1蛋白水平分别为(60.13±1.83)、(28.53±1.41)、(56.44±1.13) pg/ml,与第2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).第3、4、5组细胞MCP-1 mRNA表达水平相对第1组的倍增比值分别为1/2.55、1/1.58、1/2.37,与第2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).第3、5组细胞P47phox mRNA表达水平相对第1组的倍增比值分别为1/1.25、1/1.35,与第2组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);第4组的倍增比值为1/0.61,与第2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 草酸、COM可诱导HK-2细胞氧化应激损伤,细胞的P47phox mRNA和MCP-1 mRNA表达增加.牛磺酸可以减轻细胞的损伤,但机制可能不是通过抑制P47 phox表达的途径进行.
目的 探討牛磺痠在體外細胞培養中對草痠和草痠鈣晶體誘導的腎小管上皮細胞損傷的保護作用及機製.方法 將體外培養的人遠耑腎小管上皮細胞(HK-2)隨機分為5組:第1組,單純HK-2細胞;第2組,HK-2細胞中加入草痠和一水草痠鈣(COM);第3組,HK-2細胞中加入草痠、COM和牛磺痠;第4組,HK-2細胞中加入草痠、COM和夾竹桃痳素;第5組,HK-2細胞中加入草痠、COM和過氧化氫酶.培養6h後收集各組細胞上清液檢測乳痠脫氫酶(LDH)、過氧化氫(H2O2)、8-異前列腺素(8-IP)含量及單覈細胞趨化蛋白質-1(MCP-1)蛋白水平,RT-PCR法檢測細胞內MCP-1 mRNA、P47 phox mRNA錶達水平;MTT法測定培養24 h後的細胞存活率.結果 培養24 h後MTT法檢測第1組細胞的吸光度A值為0.996±0.044,第2組為0.626±0.011,兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05).培養6h後第1組細胞上清液H2O2、8-IP、LDH含量分彆為(18.68±0.70) mmol/L、(12.72±1.69) ng/ml、(194.05±7.91) U/L,第2組分彆為(53.27±1.88) mmol/L、(57.53±3.11)ng/ml、(484.34±29.44) U/L,兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05).第1組MCP-1蛋白水平為(17.32±2.32) pg/ml,第2組為(69.21±3.39) pg/ml,兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05).第1組與第2組細胞的MCP-1 mRNA、P47phox mRNA錶達水平倍增比值分彆為1/3.51和1/1.38,兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05).MTT法檢測第3、4、5組細胞的吸光度A值分彆為0.748±0.033、0.825±0.078、0.815 ±0.037,與第2組比較差異均有統計學意義(P＜0.05).第3、4、5組細胞上清液H2O2、8-IP、LDH含量均明顯少于第2組.第3、4、5組細胞上清液MCP-1蛋白水平分彆為(60.13±1.83)、(28.53±1.41)、(56.44±1.13) pg/ml,與第2組比較差異均有統計學意義(P＜0.05).第3、4、5組細胞MCP-1 mRNA錶達水平相對第1組的倍增比值分彆為1/2.55、1/1.58、1/2.37,與第2組比較差異均有統計學意義(P＜0.05).第3、5組細胞P47phox mRNA錶達水平相對第1組的倍增比值分彆為1/1.25、1/1.35,與第2組比較差異均無統計學意義(P＞0.05);第4組的倍增比值為1/0.61,與第2組比較差異有統計學意義(P＜0.05).結論 草痠、COM可誘導HK-2細胞氧化應激損傷,細胞的P47phox mRNA和MCP-1 mRNA錶達增加.牛磺痠可以減輕細胞的損傷,但機製可能不是通過抑製P47 phox錶達的途徑進行.
목적 탐토우광산재체외세포배양중대초산화초산개정체유도적신소관상피세포손상적보호작용급궤제.방법 장체외배양적인원단신소관상피세포(HK-2)수궤분위5조:제1조,단순HK-2세포;제2조,HK-2세포중가입초산화일수초산개(COM);제3조,HK-2세포중가입초산、COM화우광산;제4조,HK-2세포중가입초산、COM화협죽도마소;제5조,HK-2세포중가입초산、COM화과양화경매.배양6h후수집각조세포상청액검측유산탈경매(LDH)、과양화경(H2O2)、8-이전렬선소(8-IP)함량급단핵세포추화단백질-1(MCP-1)단백수평,RT-PCR법검측세포내MCP-1 mRNA、P47 phox mRNA표체수평;MTT법측정배양24 h후적세포존활솔.결과 배양24 h후MTT법검측제1조세포적흡광도A치위0.996±0.044,제2조위0.626±0.011,량조비교차이유통계학의의(P＜0.05).배양6h후제1조세포상청액H2O2、8-IP、LDH함량분별위(18.68±0.70) mmol/L、(12.72±1.69) ng/ml、(194.05±7.91) U/L,제2조분별위(53.27±1.88) mmol/L、(57.53±3.11)ng/ml、(484.34±29.44) U/L,량조비교차이균유통계학의의(P＜0.05).제1조MCP-1단백수평위(17.32±2.32) pg/ml,제2조위(69.21±3.39) pg/ml,량조비교차이유통계학의의(P＜0.05).제1조여제2조세포적MCP-1 mRNA、P47phox mRNA표체수평배증비치분별위1/3.51화1/1.38,량조비교차이균유통계학의의(P＜0.05).MTT법검측제3、4、5조세포적흡광도A치분별위0.748±0.033、0.825±0.078、0.815 ±0.037,여제2조비교차이균유통계학의의(P＜0.05).제3、4、5조세포상청액H2O2、8-IP、LDH함량균명현소우제2조.제3、4、5조세포상청액MCP-1단백수평분별위(60.13±1.83)、(28.53±1.41)、(56.44±1.13) pg/ml,여제2조비교차이균유통계학의의(P＜0.05).제3、4、5조세포MCP-1 mRNA표체수평상대제1조적배증비치분별위1/2.55、1/1.58、1/2.37,여제2조비교차이균유통계학의의(P＜0.05).제3、5조세포P47phox mRNA표체수평상대제1조적배증비치분별위1/1.25、1/1.35,여제2조비교차이균무통계학의의(P＞0.05);제4조적배증비치위1/0.61,여제2조비교차이유통계학의의(P＜0.05).결론 초산、COM가유도HK-2세포양화응격손상,세포적P47phox mRNA화MCP-1 mRNA표체증가.우광산가이감경세포적손상,단궤제가능불시통과억제P47 phox표체적도경진행.
Objective To investigate the protective effect of taurine on HK-2 cells exposed to oxalate (Ox) and calcium oxalate monohydrate crystal (COM) in vivo.Methods HK-2 cells,a proximal tubular epithelial cell line,were cultured.Five groups were divided in this study:control group (only HK-2 cells) ; Ox and COM group (HK-2 cells + Ox + COM) ; Taurine group (HK-2 cells + Ox + COM + Taurine) ; Apocynin group (HK-2 cells + Ox + COM + Apocynin) ; Catalase group (HK-2 cells + Ox + COM +Catalase).After 6 hrs,the cultures medias from each group were tested for LDH,H2O2,8-isoprostane,and MCP-1 protein.Cellular expression of MCP-1 mRNA and P47phox mRNA were determined by reverse transcriptase-polymerase chain reaction.After 24 hrs,cells livability was investigated by MTT.Results Compared with the control,cells livability was reduced when exposed to Ox and COM (P ＜ 0.05),Treatment with Taurine,Apocynin and Catalase significantly increased the cells livability (P ＜ 0.05).Compared with the control,the expression of LDH,H2O2,8-isoprostane,and cellular expression of MCP-1 mRNA and P47phox mRNA were increased following exposure to Ox and COM (P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P ＜0.05).Treatment with Taurine,Apocynin and Catalase significantly reduced the expression of LDH,H2O2,8-isoprostane,as well as the cellular expression of MCP-1 mRNA.Expression of P47phox mRNA in Taurine group was not reduced significantly (P ＞ 0.05).Conclusions This study showed that Taurine protected the HK-2 cells from oxidative injury exposed to Ox and COM by the pathway that may not be in relation to the inhibition of P47phox mRNA expression.
