中华烧伤杂志
中華燒傷雜誌
중화소상잡지
16
2014年
2期
179-181
,共3页
尚玉茹%申传安%柴家科%马丽%李大伟%李龙珠%尹凯
尚玉茹%申傳安%柴傢科%馬麗%李大偉%李龍珠%尹凱
상옥여%신전안%시가과%마려%리대위%리룡주%윤개
胰蛋白酶%连续传代%大鼠%角质形成细胞
胰蛋白酶%連續傳代%大鼠%角質形成細胞
이단백매%련속전대%대서%각질형성세포
目的 了解通过改良传代技术是否可获取高增殖活性的大鼠KC,为体外研究提供种子细胞. 方法 将从3只清洁级新生SD大鼠背部皮肤中分离、培养的原代KC按随机数字表法分为改良组和传统组,改良组采用0.25 g/L胰蛋白酶联合0.4 g/L乙二胺四乙酸消化传代,传统组采用2.5 g/L胰蛋白酶结合0.4 g/L乙二胺四乙酸消化传代.收集2组原代细胞及传代细胞于倒置相差显微镜下进行形态学观察.取部分第1代细胞,应用锥虫蓝染色法观察细胞存活情况并计算存活率(样本数为3);另取第1代细胞培养1、12、24 h,噻唑蓝比色法进行细胞黏附实验(以吸光度值表示黏附细胞数量,每时相点样本数为6).取第5代细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期,β半乳糖苷酶染色法计算衰老细胞百分比.对数据行LSD-t检验. 结果 改良组原代细胞、第5代细胞及第18代细胞形态类似,呈圆形或小的多角形,或呈鹅卵石样;传统组原代细胞形态与改良组类似,第5代细胞胞体变大,增殖缓慢,呈片状覆盖,无法再继续传代.改良组细胞存活率为(94.6±1.7)％,显著高于传统组[(66.2±2.6)％,t=15.815,P＜0.05].培养1、12、24 h,改良组黏附细胞数量分别为0.205±0.015、0.225±0.014、0.265±0.021,均显著多于传统组(0.176±0.015、0.196±0.011、0.221±0.019,t值分别为2.947、3.517、3.476,P值均小于0.05).改良组(S+G2/M)期细胞所占比例[(30.6±2.3)％]显著高于传统组[(17.0±5.6)％,t =3.890,P＜0.05].改良组衰老细胞百分比[(10.9±2.0)％]显著低于传统组[(75.9±4.1)％,t=24.624,P＜0.05]. 结论 低浓度胰蛋白酶消化法能减轻细胞损伤、提高细胞活性、增加传代次数,为实验研究创造良好条件.
目的 瞭解通過改良傳代技術是否可穫取高增殖活性的大鼠KC,為體外研究提供種子細胞. 方法 將從3隻清潔級新生SD大鼠揹部皮膚中分離、培養的原代KC按隨機數字錶法分為改良組和傳統組,改良組採用0.25 g/L胰蛋白酶聯閤0.4 g/L乙二胺四乙痠消化傳代,傳統組採用2.5 g/L胰蛋白酶結閤0.4 g/L乙二胺四乙痠消化傳代.收集2組原代細胞及傳代細胞于倒置相差顯微鏡下進行形態學觀察.取部分第1代細胞,應用錐蟲藍染色法觀察細胞存活情況併計算存活率(樣本數為3);另取第1代細胞培養1、12、24 h,噻唑藍比色法進行細胞黏附實驗(以吸光度值錶示黏附細胞數量,每時相點樣本數為6).取第5代細胞,採用流式細胞儀檢測細胞週期,β半乳糖苷酶染色法計算衰老細胞百分比.對數據行LSD-t檢驗. 結果 改良組原代細胞、第5代細胞及第18代細胞形態類似,呈圓形或小的多角形,或呈鵝卵石樣;傳統組原代細胞形態與改良組類似,第5代細胞胞體變大,增殖緩慢,呈片狀覆蓋,無法再繼續傳代.改良組細胞存活率為(94.6±1.7)％,顯著高于傳統組[(66.2±2.6)％,t=15.815,P＜0.05].培養1、12、24 h,改良組黏附細胞數量分彆為0.205±0.015、0.225±0.014、0.265±0.021,均顯著多于傳統組(0.176±0.015、0.196±0.011、0.221±0.019,t值分彆為2.947、3.517、3.476,P值均小于0.05).改良組(S+G2/M)期細胞所佔比例[(30.6±2.3)％]顯著高于傳統組[(17.0±5.6)％,t =3.890,P＜0.05].改良組衰老細胞百分比[(10.9±2.0)％]顯著低于傳統組[(75.9±4.1)％,t=24.624,P＜0.05]. 結論 低濃度胰蛋白酶消化法能減輕細胞損傷、提高細胞活性、增加傳代次數,為實驗研究創造良好條件.
목적 료해통과개량전대기술시부가획취고증식활성적대서KC,위체외연구제공충자세포. 방법 장종3지청길급신생SD대서배부피부중분리、배양적원대KC안수궤수자표법분위개량조화전통조,개량조채용0.25 g/L이단백매연합0.4 g/L을이알사을산소화전대,전통조채용2.5 g/L이단백매결합0.4 g/L을이알사을산소화전대.수집2조원대세포급전대세포우도치상차현미경하진행형태학관찰.취부분제1대세포,응용추충람염색법관찰세포존활정황병계산존활솔(양본수위3);령취제1대세포배양1、12、24 h,새서람비색법진행세포점부실험(이흡광도치표시점부세포수량,매시상점양본수위6).취제5대세포,채용류식세포의검측세포주기,β반유당감매염색법계산쇠로세포백분비.대수거행LSD-t검험. 결과 개량조원대세포、제5대세포급제18대세포형태유사,정원형혹소적다각형,혹정아란석양;전통조원대세포형태여개량조유사,제5대세포포체변대,증식완만,정편상복개,무법재계속전대.개량조세포존활솔위(94.6±1.7)％,현저고우전통조[(66.2±2.6)％,t=15.815,P＜0.05].배양1、12、24 h,개량조점부세포수량분별위0.205±0.015、0.225±0.014、0.265±0.021,균현저다우전통조(0.176±0.015、0.196±0.011、0.221±0.019,t치분별위2.947、3.517、3.476,P치균소우0.05).개량조(S+G2/M)기세포소점비례[(30.6±2.3)％]현저고우전통조[(17.0±5.6)％,t =3.890,P＜0.05].개량조쇠로세포백분비[(10.9±2.0)％]현저저우전통조[(75.9±4.1)％,t=24.624,P＜0.05]. 결론 저농도이단백매소화법능감경세포손상、제고세포활성、증가전대차수,위실험연구창조량호조건.
