中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2013年
11期
2262-2264
,共3页
穆宏凌%刘三光%何慧霞%王文斌%刘建华
穆宏凌%劉三光%何慧霞%王文斌%劉建華
목굉릉%류삼광%하혜하%왕문빈%류건화
Livin%反义寡核苷酸%胆管癌%细胞凋亡
Livin%反義寡覈苷痠%膽管癌%細胞凋亡
Livin%반의과핵감산%담관암%세포조망
Livin%Antisense oligodeoxynucleotide%Bile duct cancer%Cell apoptosis
目的 观察转染Livin反义寡核苷酸(ASODN)对人胆管癌细胞株QBC939细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体介导Livin ASODN转染QBC939细胞,于转染后60h,噻唑蓝(MTT)法检测Livin反义寡核苷酸对QBC939细胞增殖的抑制作用,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后Livin mRNA表达的变化；细胞免疫荧光化学检测转染前后Livin蛋白的表达变化；膜联蛋白V(Annexin V)-藻红蛋白(PE)流式细胞仪(FCM)法检测转染后细胞凋亡变化.结果 实验分反义(Livin ASODN)组、错义(Livin NSODN)组、脂质体组、空白对照组.转染后60 h,MTT法显示Livin ASODN组能明显促进胆管癌细胞的凋亡(46.41±1.13、3.10 ±0.44、2.66±0.26、0)；RT-PCR显示Livin ASODN组LivinmRNA表达水平明显低于各对照组(54.96 ±3.00、88.31 ±2.50、85.90±0.62、90.36±2.43)(P＜0.05)；细胞免疫荧光化学法显示Livin ASODN组Livin蛋白表达明显低于各对照组(39.05±2.52、8.60 ±3.60、6.37 ±2.71、0)(P＜0.05)；流式细胞仪分析结果显示Livin ASODN组的细胞凋亡明显高于各对照组[(36.98±4.09)％、(3.77±0.25)％、(7.51±0.30)％、(6.83±0.23)％].结论 脂质体介导转染Livin ASODN能特异性抑制QBC939细胞中的Livin基因表达,下调Livin蛋白的表达,抑制胆管癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.
目的 觀察轉染Livin反義寡覈苷痠(ASODN)對人膽管癌細胞株QBC939細胞Livin mRNA和蛋白錶達的抑製作用及其對細胞凋亡的影響.方法 設計閤成全硫代燐痠化脩飾的Livin ASODN,脂質體介導Livin ASODN轉染QBC939細胞,于轉染後60h,噻唑藍(MTT)法檢測Livin反義寡覈苷痠對QBC939細胞增殖的抑製作用,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測轉染前後Livin mRNA錶達的變化；細胞免疫熒光化學檢測轉染前後Livin蛋白的錶達變化；膜聯蛋白V(Annexin V)-藻紅蛋白(PE)流式細胞儀(FCM)法檢測轉染後細胞凋亡變化.結果 實驗分反義(Livin ASODN)組、錯義(Livin NSODN)組、脂質體組、空白對照組.轉染後60 h,MTT法顯示Livin ASODN組能明顯促進膽管癌細胞的凋亡(46.41±1.13、3.10 ±0.44、2.66±0.26、0)；RT-PCR顯示Livin ASODN組LivinmRNA錶達水平明顯低于各對照組(54.96 ±3.00、88.31 ±2.50、85.90±0.62、90.36±2.43)(P＜0.05)；細胞免疫熒光化學法顯示Livin ASODN組Livin蛋白錶達明顯低于各對照組(39.05±2.52、8.60 ±3.60、6.37 ±2.71、0)(P＜0.05)；流式細胞儀分析結果顯示Livin ASODN組的細胞凋亡明顯高于各對照組[(36.98±4.09)％、(3.77±0.25)％、(7.51±0.30)％、(6.83±0.23)％].結論 脂質體介導轉染Livin ASODN能特異性抑製QBC939細胞中的Livin基因錶達,下調Livin蛋白的錶達,抑製膽管癌細胞增殖,併誘導細胞凋亡.
목적 관찰전염Livin반의과핵감산(ASODN)대인담관암세포주QBC939세포Livin mRNA화단백표체적억제작용급기대세포조망적영향.방법 설계합성전류대린산화수식적Livin ASODN,지질체개도Livin ASODN전염QBC939세포,우전염후60h,새서람(MTT)법검측Livin반의과핵감산대QBC939세포증식적억제작용,역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측전염전후Livin mRNA표체적변화；세포면역형광화학검측전염전후Livin단백적표체변화；막련단백V(Annexin V)-조홍단백(PE)류식세포의(FCM)법검측전염후세포조망변화.결과 실험분반의(Livin ASODN)조、착의(Livin NSODN)조、지질체조、공백대조조.전염후60 h,MTT법현시Livin ASODN조능명현촉진담관암세포적조망(46.41±1.13、3.10 ±0.44、2.66±0.26、0)；RT-PCR현시Livin ASODN조LivinmRNA표체수평명현저우각대조조(54.96 ±3.00、88.31 ±2.50、85.90±0.62、90.36±2.43)(P＜0.05)；세포면역형광화학법현시Livin ASODN조Livin단백표체명현저우각대조조(39.05±2.52、8.60 ±3.60、6.37 ±2.71、0)(P＜0.05)；류식세포의분석결과현시Livin ASODN조적세포조망명현고우각대조조[(36.98±4.09)％、(3.77±0.25)％、(7.51±0.30)％、(6.83±0.23)％].결론 지질체개도전염Livin ASODN능특이성억제QBC939세포중적Livin기인표체,하조Livin단백적표체,억제담관암세포증식,병유도세포조망.
Objective To study the effect of transfection of Livin antisense oligodeoxynucleotide (Livin ASODN) on Livin mRNA and Livin protein expression and apoptosis of QBC939 cells.Methods Livin ASODN were transfected into cell line QBC939 byLipofectamine TM 2000.60 h After transfection,to measure Livin mRNA expression by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and Livin protein expression by immunohistochemistry and confocal laser scanning microscopy ; the changes of cell apoptotic were detected by methyl thiazol tetrazolium (MTT).and the apoptosis of QBC939 cell was detected by Annexin V-PE flow cytometry (FCM) after the transfection.Results The mRNA and protein expression level of Livin in ASODN group was significantly lower than that in control group (P ＜0.05) (54.96 ± 3.00,88.31 ± 2.50,85.90 ± 0.62,90.36 ± 2.43) ; the results of MTT showed that the rate of cell apoptosis of QBC939 cells were the most obvious at 60 hours after Livin ASODN transfection (46.41 ± 1.13,3.10 ±0.44,2.66 ± 0.26,0) (P ＜ 0.05).the apoptosis of QBC939 cell was higher than those in control group after Livin ASODN transfection [(36.98 ±4.09)％,(3.77 ±0.25)％,(7.51 ±0.3)％,(6.83 ±0.23) ％].Conclusion The transfection of Livin ASODN inhibited Livin gene and protein expression,and Obviously induced apoptosis of Bile duct cancer QBC939 cells,which may be the new target for gene therapy in Bile duct cancer.
