CAJ | 학술논문

目的建立稳定有效的小鼠视网膜小胶质细胞的分离培养方法,并研究小鼠视网膜小胶质细胞培养中的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的使用方法. 方法取1 d C57乳鼠视网膜,吹打至碎片后接种于DMEM/F12完全培养基中,待混合胶质细胞充分长出后并分层后,恒温振荡法分离上层细胞,所得细胞使用抗体iba-1及F4/80双标免疫荧光染色鉴定细胞种类.将所得细胞,按添加mM-CSF方式进行分组:A组:空白对照组;B组:加入50 ng/ml mM-CSF且换液后补充;C组:加入100 ng/ml mM-CSF且换液后补充;D组:加入50 ng/ml mM-CSF且换液后不补充.在相差显微镜下观察各分组小胶质细胞培养情况;用MTT法检测10、50、100 ng/ml不同浓度mM-CSF对小胶质细胞培养增殖效果. 结果所得细胞经iba-1及F4/80双标免疫荧光双染证实为小胶质细胞.培养10 d后,A组细胞逐渐减少;B组及C组细胞增殖明显,但形态变为长梭形;D组细胞增殖,并呈典型小胶质细胞分枝状.MTT实验结果显示100 ng/ml浓度mM-CSF刺激下细胞增殖最强,50 ng/ml浓度mM-CSF次之,而10 ng/ml浓度mM-CSF刺激细胞增殖能力最弱. 结论本研究发现恒温振荡混合视网膜胶质细胞可以分离小鼠视网膜小胶质细胞,单次使用50 ng/ml浓度mM-CSF可以有效促进小鼠视网膜小胶质细胞存活并增殖.
목적 건립은정유효적소서시망막소효질세포적분리배양방법,병연구소서시망막소효질세포배양중적거서세포집락자격인자(M-CSF)적사용방법. 방법 취1 d C57유서시망막,취타지쇄편후접충우DMEM/F12완전배양기중,대혼합효질세포충분장출후병분층후,항온진탕법분리상층세포,소득세포사용항체iba-1급F4/80쌍표면역형광염색감정세포충류.장소득세포,안첨가mM-CSF방식진행분조:A조:공백대조조;B조:가입50 ng/ml mM-CSF차환액후보충;C조:가입100 ng/ml mM-CSF차환액후보충;D조:가입50 ng/ml mM-CSF차환액후불보충.재상차현미경하관찰각분조소효질세포배양정황;용MTT법검측10、50、100 ng/ml불동농도mM-CSF대소효질세포배양증식효과. 결과 소득세포경iba-1급F4/80쌍표면역형광쌍염증실위소효질세포.배양10 d후,A조세포축점감소;B조급C조세포증식명현,단형태변위장사형;D조세포증식,병정전형소효질세포분지상.MTT실험결과현시100 ng/ml농도mM-CSF자격하세포증식최강,50 ng/ml농도mM-CSF차지,이10 ng/ml농도mM-CSF자격세포증식능력최약. 결론 본연구발현항온진탕혼합시망막효질세포가이분리소서시망막소효질세포,단차사용50 ng/ml농도mM-CSF가이유효촉진소서시망막소효질세포존활병증식.
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