中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2014年
8期
612-616
,共5页
汤佳城%梁霄%马锐%刘敬华%刘小龙%蔡秀军
湯佳城%樑霄%馬銳%劉敬華%劉小龍%蔡秀軍
탕가성%량소%마예%류경화%류소룡%채수군
氯喹%3-甲基腺嘌呤%自噬%胆囊癌%5-氟尿嘧啶
氯喹%3-甲基腺嘌呤%自噬%膽囊癌%5-氟尿嘧啶
록규%3-갑기선표령%자서%담낭암%5-불뇨밀정
目的 通过抑制胆囊癌GBC-SD细胞自噬的方法检测自噬在化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制GBC-SD细胞生长过程中的作用,探讨胆囊癌对化疗药物不敏感的可能机制及自噬抑制剂作为胆囊癌辅助治疗药物的价值.方法 通过不同自嗜抑制剂[氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)]预处理或沉默自噬相关基因5和7后,对比GBC-SD细胞在5-FU作用下增殖率、活性抑制率、凋亡率及细胞周期各时相变化.采用免疫印迹法检测5-FU处理后GBC-SD细胞中LC3-Ⅱ、p62表达水平.采用透射电镜检测空白处理组,5-FU处理组细胞中自噬小泡数量.通过荧光显微镜观察转染GFP-LC3质粒的GBC-SD细胞中的绿色荧光点.流式细胞仪检测CQ预处理12 h后,5-FU诱导下细胞凋亡率.结果 药物处理或基因沉默方法抑制自噬均能增加5-FU对GBC-SD细胞的毒性作用,导致细胞凋亡增加及G0/G1期阻滞.5-FU对GBC-SD细胞增殖及细胞活性的抑制率与其作用时间及浓度呈正比,其中10 μmol/L浓度下5-FU对GBC-SD细胞的抑制率可达30%左右,对比CQ、3-MA或5-FU单独处理组,分别使用100 μmol/L CQ 或5 mmol/L 3-MA预处理GBC-SD细胞12 h后,5-FU作用下GBC-SD细胞的增殖率显著下降,且该趋势差异有统计学意义,免疫印迹结果显示5-FU处理可增强GBC-SD细胞中LC3-Ⅱ表达水平,下调p62表达水平.透射电镜检测结果显示对比空白处理组,5-FU处理组细胞中自噬小泡数量明显增多.荧光显微镜观察转染GFP-LC3质粒的GBC-SD细胞,发现5-FU处理组中绿色荧光点明显增多.流式细胞仪检测发现,CQ预处理12 h后,5-FU诱导下细胞凋亡率由34.3%上升至46.2%.结论 5-FU处理可诱导GBC-SD细胞发生自噬,通过抑制自噬可增强5-FU对该细胞的化疗效果.
目的 通過抑製膽囊癌GBC-SD細胞自噬的方法檢測自噬在化療藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)抑製GBC-SD細胞生長過程中的作用,探討膽囊癌對化療藥物不敏感的可能機製及自噬抑製劑作為膽囊癌輔助治療藥物的價值.方法 通過不同自嗜抑製劑[氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)]預處理或沉默自噬相關基因5和7後,對比GBC-SD細胞在5-FU作用下增殖率、活性抑製率、凋亡率及細胞週期各時相變化.採用免疫印跡法檢測5-FU處理後GBC-SD細胞中LC3-Ⅱ、p62錶達水平.採用透射電鏡檢測空白處理組,5-FU處理組細胞中自噬小泡數量.通過熒光顯微鏡觀察轉染GFP-LC3質粒的GBC-SD細胞中的綠色熒光點.流式細胞儀檢測CQ預處理12 h後,5-FU誘導下細胞凋亡率.結果 藥物處理或基因沉默方法抑製自噬均能增加5-FU對GBC-SD細胞的毒性作用,導緻細胞凋亡增加及G0/G1期阻滯.5-FU對GBC-SD細胞增殖及細胞活性的抑製率與其作用時間及濃度呈正比,其中10 μmol/L濃度下5-FU對GBC-SD細胞的抑製率可達30%左右,對比CQ、3-MA或5-FU單獨處理組,分彆使用100 μmol/L CQ 或5 mmol/L 3-MA預處理GBC-SD細胞12 h後,5-FU作用下GBC-SD細胞的增殖率顯著下降,且該趨勢差異有統計學意義,免疫印跡結果顯示5-FU處理可增彊GBC-SD細胞中LC3-Ⅱ錶達水平,下調p62錶達水平.透射電鏡檢測結果顯示對比空白處理組,5-FU處理組細胞中自噬小泡數量明顯增多.熒光顯微鏡觀察轉染GFP-LC3質粒的GBC-SD細胞,髮現5-FU處理組中綠色熒光點明顯增多.流式細胞儀檢測髮現,CQ預處理12 h後,5-FU誘導下細胞凋亡率由34.3%上升至46.2%.結論 5-FU處理可誘導GBC-SD細胞髮生自噬,通過抑製自噬可增彊5-FU對該細胞的化療效果.
목적 통과억제담낭암GBC-SD세포자서적방법검측자서재화료약물5-불뇨밀정(5-FU)억제GBC-SD세포생장과정중적작용,탐토담낭암대화료약물불민감적가능궤제급자서억제제작위담낭암보조치료약물적개치.방법 통과불동자기억제제[록규(CQ)、3-갑기선표령(3-MA)]예처리혹침묵자서상관기인5화7후,대비GBC-SD세포재5-FU작용하증식솔、활성억제솔、조망솔급세포주기각시상변화.채용면역인적법검측5-FU처리후GBC-SD세포중LC3-Ⅱ、p62표체수평.채용투사전경검측공백처리조,5-FU처리조세포중자서소포수량.통과형광현미경관찰전염GFP-LC3질립적GBC-SD세포중적록색형광점.류식세포의검측CQ예처리12 h후,5-FU유도하세포조망솔.결과 약물처리혹기인침묵방법억제자서균능증가5-FU대GBC-SD세포적독성작용,도치세포조망증가급G0/G1기조체.5-FU대GBC-SD세포증식급세포활성적억제솔여기작용시간급농도정정비,기중10 μmol/L농도하5-FU대GBC-SD세포적억제솔가체30%좌우,대비CQ、3-MA혹5-FU단독처리조,분별사용100 μmol/L CQ 혹5 mmol/L 3-MA예처리GBC-SD세포12 h후,5-FU작용하GBC-SD세포적증식솔현저하강,차해추세차이유통계학의의,면역인적결과현시5-FU처리가증강GBC-SD세포중LC3-Ⅱ표체수평,하조p62표체수평.투사전경검측결과현시대비공백처리조,5-FU처리조세포중자서소포수량명현증다.형광현미경관찰전염GFP-LC3질립적GBC-SD세포,발현5-FU처리조중록색형광점명현증다.류식세포의검측발현,CQ예처리12 h후,5-FU유도하세포조망솔유34.3%상승지46.2%.결론 5-FU처리가유도GBC-SD세포발생자서,통과억제자서가증강5-FU대해세포적화료효과.
