中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
8期
733-737
,共5页
血红蛋白A,糖基化%血红蛋白类%丝氨酸内肽酶类%胰蛋白酶%色谱法,高压液相%串联质谱法
血紅蛋白A,糖基化%血紅蛋白類%絲氨痠內肽酶類%胰蛋白酶%色譜法,高壓液相%串聯質譜法
혈홍단백A,당기화%혈홍단백류%사안산내태매류%이단백매%색보법,고압액상%천련질보법
Hemoglobin A,glycosylated%Hemoglobins%Serine endopeptidases%Trypsin%Chromatography,high pressure liquid%Tandem mass spectrometry
目的 探讨两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)在质谱法测定糖化血红蛋白(HbAIC)中的差异性研究.方法 病例对照研究.收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200 ml,患者来源中男90例,女70例,年龄20 ～ 60岁,平均年龄(44 ±16)岁.依据国际临床化学协会(IFCC)推荐的基于质谱法的HbAIC参考测量方法处理收集的血液样本(样本编号为:201201、201202、201203),分别应用两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)酶解样本中的血红蛋白,使用固相萃取的方法进行质谱前处理,设定最适实验条件后,应用液相色谱串联质谱测定样本中HbAIC的含量.使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查,所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数(IPI)数据库搜索RAW文件,检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体(HbS、HbC、HbD、HbE)进行比对.采用SPSS13.0统计软件和Excel 2003对测量结果进行相关性分析,组间比较采用独立样本t检验.结果 经液相色谱串联质谱检测结果可知,在检测HbAIC浓度时,分别用Glu-C和Lys-C酶解血液样本201201、201202、201203,其中经Lys-C酶解的样本HbAIc检测结果分别为(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11) mmol/mol,经GIu-C酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60) mmol/mol,组间比较差异无统计学意义,两种方法测定结果绘制相关曲线,R2均＞0.995.经Sequest进行人类数据库检索,未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在.结论 在质谱法检测HbAIc时,应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时,可以得到较为一致的结果,两种方法检测结果相关性良好.
目的 探討兩種常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)在質譜法測定糖化血紅蛋白(HbAIC)中的差異性研究.方法 病例對照研究.收集2012年2至4月北京朝暘醫院門診和住院患者剩餘血液閤計200 ml,患者來源中男90例,女70例,年齡20 ～ 60歲,平均年齡(44 ±16)歲.依據國際臨床化學協會(IFCC)推薦的基于質譜法的HbAIC參攷測量方法處理收集的血液樣本(樣本編號為:201201、201202、201203),分彆應用兩種常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)酶解樣本中的血紅蛋白,使用固相萃取的方法進行質譜前處理,設定最適實驗條件後,應用液相色譜串聯質譜測定樣本中HbAIC的含量.使用Sequest軟件對製備的實驗樣本進行血紅蛋白變異體的篩查,所有由液相色譜串聯質譜穫得的質譜結果都需使用Sequest軟件針對人類國際蛋白指數(IPI)數據庫搜索RAW文件,檢索結果與血紅蛋白變異體網站上公佈的4種常見的血紅蛋白變異體(HbS、HbC、HbD、HbE)進行比對.採用SPSS13.0統計軟件和Excel 2003對測量結果進行相關性分析,組間比較採用獨立樣本t檢驗.結果 經液相色譜串聯質譜檢測結果可知,在檢測HbAIC濃度時,分彆用Glu-C和Lys-C酶解血液樣本201201、201202、201203,其中經Lys-C酶解的樣本HbAIc檢測結果分彆為(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11) mmol/mol,經GIu-C酶解的樣本糖化血紅蛋白檢測結果分彆為(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60) mmol/mol,組間比較差異無統計學意義,兩種方法測定結果繪製相關麯線,R2均＞0.995.經Sequest進行人類數據庫檢索,未篩查齣4種常見的血紅蛋白變異體的存在.結論 在質譜法檢測HbAIc時,應用上述兩種常用的蛋白水解酶酶解血液樣本時,可以得到較為一緻的結果,兩種方法檢測結果相關性良好.
목적 탐토량충상용적단백수해매(Glu-C화Lys-C)재질보법측정당화혈홍단백(HbAIC)중적차이성연구.방법 병례대조연구.수집2012년2지4월북경조양의원문진화주원환자잉여혈액합계200 ml,환자래원중남90례,녀70례,년령20 ～ 60세,평균년령(44 ±16)세.의거국제림상화학협회(IFCC)추천적기우질보법적HbAIC삼고측량방법처리수집적혈액양본(양본편호위:201201、201202、201203),분별응용량충상용적단백수해매(Glu-C화Lys-C)매해양본중적혈홍단백,사용고상췌취적방법진행질보전처리,설정최괄실험조건후,응용액상색보천련질보측정양본중HbAIC적함량.사용Sequest연건대제비적실험양본진행혈홍단백변이체적사사,소유유액상색보천련질보획득적질보결과도수사용Sequest연건침대인류국제단백지수(IPI)수거고수색RAW문건,검색결과여혈홍단백변이체망참상공포적4충상견적혈홍단백변이체(HbS、HbC、HbD、HbE)진행비대.채용SPSS13.0통계연건화Excel 2003대측량결과진행상관성분석,조간비교채용독립양본t검험.결과 경액상색보천련질보검측결과가지,재검측HbAIC농도시,분별용Glu-C화Lys-C매해혈액양본201201、201202、201203,기중경Lys-C매해적양본HbAIc검측결과분별위(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11) mmol/mol,경GIu-C매해적양본당화혈홍단백검측결과분별위(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60) mmol/mol,조간비교차이무통계학의의,량충방법측정결과회제상관곡선,R2균＞0.995.경Sequest진행인류수거고검색,미사사출4충상견적혈홍단백변이체적존재.결론 재질보법검측HbAIc시,응용상술량충상용적단백수해매매해혈액양본시,가이득도교위일치적결과,량충방법검측결과상관성량호.
Objective To explore the difference of two kinds of proteolytic enzymes (GLU-C and Lys-C trypsin),hemoglobin A1c were measured in mass spectrometry.Methods Based on the IFCC recommended hemoglobin A1c reference measurement method by mass spectrometry,the blood samples were preparied (the number of these blood samples:201201,201202,201203).Hemoglobin in the samples were enzymed respectively by two kinds of proteolytic enzymes (Glu-C and Lys-C),before the mass spectra which be used solid phase extraction method,under the optimal experimental conditions,hemoglobin A1c in the sample were measured by the liquid chromatography tandem mass spectrometry and screened of variant hemoglobin with sequest software.All results by mass spectrometry are required to use the Sequest software to search RAW file in the human IPI Database,retrieve four common hemoglobin variant published results and compare hemoglobin variant sites,using statistical software SPSS13.0 and Excel 2003 on the results in the correlation analysis,compare between groups by the independent sample t test.Results In the detection of hemoglobin A1c,respectively Glu-C and Lys-C blood which the samples were enzymed,results of hemoglobin A1c by Lys-C were (34.70 ± 2.80),(51.76 ± 1.60),(73.39 ± 1.11) mmol/mol,results of hemoglobin A1c by Glu-C were(33.12 ± 1.48),(54.54 ± 2.50),(75.40 ± 3.60) mmol/mol,the difference between groups was not statistically significant,the results of two methods of drawing curve,all R2 ＞ 0.995.Searching the human database with sequest software,four common hemoglobin variant were not be finded.Conclusions In the detection of hemoglobin A1c by the mass spectrometry,the application of the above two kinds of proteolytic enzyme in the blood samples,that can be more consistent results,test results of two methods have a good correlation.
