国际输血及血液学杂志
國際輸血及血液學雜誌
국제수혈급혈액학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF BLOOD TRANSFUSION AND HEMATOLOGY
2014年
1期
5-10
,共6页
谷红红%黄一虹%武家庆%刘苍春%曾令宇%李德鹏%李振宇%徐开林
穀紅紅%黃一虹%武傢慶%劉蒼春%曾令宇%李德鵬%李振宇%徐開林
곡홍홍%황일홍%무가경%류창춘%증령우%리덕붕%리진우%서개림
树突状细胞,调节性%免疫耐受%小鼠%细胞因子%细胞培养
樹突狀細胞,調節性%免疫耐受%小鼠%細胞因子%細胞培養
수돌상세포,조절성%면역내수%소서%세포인자%세포배양
Regulatory dendritic cells%Immune tolerance%Mouse%Cytokine%Culture
目的 体外诱导培养小鼠骨髓来源调节性树突状细胞(DCreg),并从其细胞形态、免疫表型、功能特征等对其进行鉴定.方法 无菌条件下取C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞,按体外诱导培养的培养体系不同,将其分为3组:未成熟DC(imDC)组(n=16),用含重组鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)20 ng/mL,重组鼠白细胞介素-4(rmIL-4)10 ng/mL的RPMI 1640培养基诱导培养7 d;②成熟DC(mDC)组,用含rmGM-CSF 20 ng/mL,rmIL-4 10 ng/mL的RPMI 1640培养基培养6d,予细菌脂多糖(LPS)刺激24 h,使其成熟;③DCreg组:用含rmGM-CSF 20 ng/mL,IL-10 20 ng/mL,转化生长因子-β1(TGF-β1)20 ng/mL的RPMI 1640培养基培养7d,LPS刺激24 h使其成熟(所有实验动物处置符合动物伦理学标准).显微镜下观察DC的形态、超微结构,流式细胞仪检测其免疫表型,CCK-8法检测刺激淋巴细胞增殖活性,趋化实验检测细胞迁移能力.结果 ①利用不同细胞因子组合的培养体系能诱导生成具有典型树枝状突起的DC细胞,透射电镜下观察到mDC放射状突起多而密集,细胞表面褶皱多,imDC、DCreg放射状突起较稀疏,细胞表面褶皱减少;②mDC高表达CD80、CD86、CD11c和IA/IE分子,imDC低表达CD80、CD86、IA/IE分子,高表达CD11c,DCreg高表达CD45RB,低表达CD11c、CD80、CD86;③DCreg组和imDC组体外刺激异基因淋巴细胞增殖能力较弱.3组DC刺激异基因淋巴细胞增殖率比较,差异有统计学意义(F=163.24,P＜0.01);④DCreg的趋化迁移能力最强.3组迁移率相比,差异有统计学意义(F=560.644,P＜0.01).结论 应用细胞因子GM-CSF,IL-10和TGF-β1能成功诱导培养出小鼠骨髓源性CD11clowCD45RBhigh调节性DC,其功能特征为移植免疫耐受的进一步研究奠定实验基础.
目的 體外誘導培養小鼠骨髓來源調節性樹突狀細胞(DCreg),併從其細胞形態、免疫錶型、功能特徵等對其進行鑒定.方法 無菌條件下取C57BL/6小鼠的骨髓單箇覈細胞,按體外誘導培養的培養體繫不同,將其分為3組:未成熟DC(imDC)組(n=16),用含重組鼠粒-巨噬細胞集落刺激因子(rmGM-CSF)20 ng/mL,重組鼠白細胞介素-4(rmIL-4)10 ng/mL的RPMI 1640培養基誘導培養7 d;②成熟DC(mDC)組,用含rmGM-CSF 20 ng/mL,rmIL-4 10 ng/mL的RPMI 1640培養基培養6d,予細菌脂多糖(LPS)刺激24 h,使其成熟;③DCreg組:用含rmGM-CSF 20 ng/mL,IL-10 20 ng/mL,轉化生長因子-β1(TGF-β1)20 ng/mL的RPMI 1640培養基培養7d,LPS刺激24 h使其成熟(所有實驗動物處置符閤動物倫理學標準).顯微鏡下觀察DC的形態、超微結構,流式細胞儀檢測其免疫錶型,CCK-8法檢測刺激淋巴細胞增殖活性,趨化實驗檢測細胞遷移能力.結果 ①利用不同細胞因子組閤的培養體繫能誘導生成具有典型樹枝狀突起的DC細胞,透射電鏡下觀察到mDC放射狀突起多而密集,細胞錶麵褶皺多,imDC、DCreg放射狀突起較稀疏,細胞錶麵褶皺減少;②mDC高錶達CD80、CD86、CD11c和IA/IE分子,imDC低錶達CD80、CD86、IA/IE分子,高錶達CD11c,DCreg高錶達CD45RB,低錶達CD11c、CD80、CD86;③DCreg組和imDC組體外刺激異基因淋巴細胞增殖能力較弱.3組DC刺激異基因淋巴細胞增殖率比較,差異有統計學意義(F=163.24,P＜0.01);④DCreg的趨化遷移能力最彊.3組遷移率相比,差異有統計學意義(F=560.644,P＜0.01).結論 應用細胞因子GM-CSF,IL-10和TGF-β1能成功誘導培養齣小鼠骨髓源性CD11clowCD45RBhigh調節性DC,其功能特徵為移植免疫耐受的進一步研究奠定實驗基礎.
목적 체외유도배양소서골수래원조절성수돌상세포(DCreg),병종기세포형태、면역표형、공능특정등대기진행감정.방법 무균조건하취C57BL/6소서적골수단개핵세포,안체외유도배양적배양체계불동,장기분위3조:미성숙DC(imDC)조(n=16),용함중조서립-거서세포집락자격인자(rmGM-CSF)20 ng/mL,중조서백세포개소-4(rmIL-4)10 ng/mL적RPMI 1640배양기유도배양7 d;②성숙DC(mDC)조,용함rmGM-CSF 20 ng/mL,rmIL-4 10 ng/mL적RPMI 1640배양기배양6d,여세균지다당(LPS)자격24 h,사기성숙;③DCreg조:용함rmGM-CSF 20 ng/mL,IL-10 20 ng/mL,전화생장인자-β1(TGF-β1)20 ng/mL적RPMI 1640배양기배양7d,LPS자격24 h사기성숙(소유실험동물처치부합동물윤리학표준).현미경하관찰DC적형태、초미결구,류식세포의검측기면역표형,CCK-8법검측자격림파세포증식활성,추화실험검측세포천이능력.결과 ①이용불동세포인자조합적배양체계능유도생성구유전형수지상돌기적DC세포,투사전경하관찰도mDC방사상돌기다이밀집,세포표면습추다,imDC、DCreg방사상돌기교희소,세포표면습추감소;②mDC고표체CD80、CD86、CD11c화IA/IE분자,imDC저표체CD80、CD86、IA/IE분자,고표체CD11c,DCreg고표체CD45RB,저표체CD11c、CD80、CD86;③DCreg조화imDC조체외자격이기인림파세포증식능력교약.3조DC자격이기인림파세포증식솔비교,차이유통계학의의(F=163.24,P＜0.01);④DCreg적추화천이능력최강.3조천이솔상비,차이유통계학의의(F=560.644,P＜0.01).결론 응용세포인자GM-CSF,IL-10화TGF-β1능성공유도배양출소서골수원성CD11clowCD45RBhigh조절성DC,기공능특정위이식면역내수적진일보연구전정실험기출.
