中华妇产科杂志
中華婦產科雜誌
중화부산과잡지
CHINESE JOUNAL OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY
2013年
1期
29-33
,共5页
范明松%姜子燕%邹艳芬%瞿琳%周雪%孙丽洲
範明鬆%薑子燕%鄒豔芬%瞿琳%週雪%孫麗洲
범명송%강자연%추염분%구림%주설%손려주
胎膜早破%金属蛋白酶1组织抑制剂%基质金属蛋白酶9%NF-κB%转化生长因子β1%羊膜
胎膜早破%金屬蛋白酶1組織抑製劑%基質金屬蛋白酶9%NF-κB%轉化生長因子β1%羊膜
태막조파%금속단백매1조직억제제%기질금속단백매9%NF-κB%전화생장인자β1%양막
Fetal membranes,premature rupture%Tissue inhibitor of metalloproteinase-1%Matrix metalloproteinase 9%NF-kappa B%Transforming growth factor betal%Amnion
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对羊膜WISH细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织抑制物1(TIMP-1)和核因子κB(NF-κB)表达的影响及其调控机制.方法 在羊膜细胞系WISH细胞中分别加入不同浓度(0、2、10、20 ng/ml)的TGF-β1,培养24 h后,分别应用逆转录(RT)PCR技术检测WISH细胞中TIMP-1及MMP-9 mRNA的表达水平,蛋白印迹法检测TIMP-1、MMP-9及NF-κB蛋白的表达.结果 (1)TIMP-1 mRNA及蛋白表达:经不同浓度TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)处理后,WISH细胞中TIMP-1 mRNA的表达水平随TGF-β1浓度的增加而升高,分别为0.413±0.036、0.623±0.058、1.392±0.124及1.387±0.102,其中2、10及20 ng/ml浓度时TIMP-1 mRNA表达水平分别与0 ng/ml浓度比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05)；WISH细胞中TIMP-1蛋白表达水平随TGF-β1浓度的增加而升高,分别为0.357±0.031、0.596±0.048、1.243±0.097及1.359±0.121,2、10及20 ng/ml浓度的TGF-β1处理后,WISH细胞中TIMP-1蛋白表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2) MMP-9 mRNA及蛋白表达:经不同浓度的TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)处理后,WISH细胞中MMP-9 mRNA表达水平随TGF-β1浓度的增加而降低,分别为1.325±0.056、0.987±0.081、0.610±0.034及0.347±0.023,其中2、10及20 ng/ml浓度时MMP-9 mRNA表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；WISH细胞中MMP-9蛋白表达水平随TGF-β1浓度的增加而降低,分别为1.119±0.064、1.008±0.052、0.578±0.041及0.401±0.015,2、10及20 ng/ml浓度时MMP-9蛋白的表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3) NF-κB蛋白表达:经2、10、20 ng/ml浓度时TGF-β1处理后,WISH细胞中NF-κB蛋白的表达水平分别为1.116±0.045、0.796±0.041及0.359±0.021,分别与0 ng/ml浓度时(1.423±0.065)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 羊膜WISH细胞中TGF-β1浓度降低,可引起羊膜细胞中TIMP-1 mRNA及蛋白表达水平下降,MMP-9 mRNA及蛋白表达水平升高,导致两者在羊膜组织中的比例失衡,此与胎膜破裂的发生机制有关；TGF-β1通过抑制羊膜细胞中NF-κB通路而调控MMP-9的表达,从而对胎膜破裂有一定的保护作用.
目的 探討轉化生長因子β1(TGF-β1)對羊膜WISH細胞中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)及其組織抑製物1(TIMP-1)和覈因子κB(NF-κB)錶達的影響及其調控機製.方法 在羊膜細胞繫WISH細胞中分彆加入不同濃度(0、2、10、20 ng/ml)的TGF-β1,培養24 h後,分彆應用逆轉錄(RT)PCR技術檢測WISH細胞中TIMP-1及MMP-9 mRNA的錶達水平,蛋白印跡法檢測TIMP-1、MMP-9及NF-κB蛋白的錶達.結果 (1)TIMP-1 mRNA及蛋白錶達:經不同濃度TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)處理後,WISH細胞中TIMP-1 mRNA的錶達水平隨TGF-β1濃度的增加而升高,分彆為0.413±0.036、0.623±0.058、1.392±0.124及1.387±0.102,其中2、10及20 ng/ml濃度時TIMP-1 mRNA錶達水平分彆與0 ng/ml濃度比較,差異均有統計學意義(P ＜0.05)；WISH細胞中TIMP-1蛋白錶達水平隨TGF-β1濃度的增加而升高,分彆為0.357±0.031、0.596±0.048、1.243±0.097及1.359±0.121,2、10及20 ng/ml濃度的TGF-β1處理後,WISH細胞中TIMP-1蛋白錶達水平分彆與0 ng/ml濃度時比較,差異有統計學意義(P＜0.05).(2) MMP-9 mRNA及蛋白錶達:經不同濃度的TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)處理後,WISH細胞中MMP-9 mRNA錶達水平隨TGF-β1濃度的增加而降低,分彆為1.325±0.056、0.987±0.081、0.610±0.034及0.347±0.023,其中2、10及20 ng/ml濃度時MMP-9 mRNA錶達水平分彆與0 ng/ml濃度時比較,差異有統計學意義(P＜0.05)；WISH細胞中MMP-9蛋白錶達水平隨TGF-β1濃度的增加而降低,分彆為1.119±0.064、1.008±0.052、0.578±0.041及0.401±0.015,2、10及20 ng/ml濃度時MMP-9蛋白的錶達水平分彆與0 ng/ml濃度時比較,差異有統計學意義(P＜0.05).(3) NF-κB蛋白錶達:經2、10、20 ng/ml濃度時TGF-β1處理後,WISH細胞中NF-κB蛋白的錶達水平分彆為1.116±0.045、0.796±0.041及0.359±0.021,分彆與0 ng/ml濃度時(1.423±0.065)比較,差異均有統計學意義(P＜0.05).結論 羊膜WISH細胞中TGF-β1濃度降低,可引起羊膜細胞中TIMP-1 mRNA及蛋白錶達水平下降,MMP-9 mRNA及蛋白錶達水平升高,導緻兩者在羊膜組織中的比例失衡,此與胎膜破裂的髮生機製有關；TGF-β1通過抑製羊膜細胞中NF-κB通路而調控MMP-9的錶達,從而對胎膜破裂有一定的保護作用.
목적 탐토전화생장인자β1(TGF-β1)대양막WISH세포중기질금속단백매9(MMP-9)급기조직억제물1(TIMP-1)화핵인자κB(NF-κB)표체적영향급기조공궤제.방법 재양막세포계WISH세포중분별가입불동농도(0、2、10、20 ng/ml)적TGF-β1,배양24 h후,분별응용역전록(RT)PCR기술검측WISH세포중TIMP-1급MMP-9 mRNA적표체수평,단백인적법검측TIMP-1、MMP-9급NF-κB단백적표체.결과 (1)TIMP-1 mRNA급단백표체:경불동농도TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)처리후,WISH세포중TIMP-1 mRNA적표체수평수TGF-β1농도적증가이승고,분별위0.413±0.036、0.623±0.058、1.392±0.124급1.387±0.102,기중2、10급20 ng/ml농도시TIMP-1 mRNA표체수평분별여0 ng/ml농도비교,차이균유통계학의의(P ＜0.05)；WISH세포중TIMP-1단백표체수평수TGF-β1농도적증가이승고,분별위0.357±0.031、0.596±0.048、1.243±0.097급1.359±0.121,2、10급20 ng/ml농도적TGF-β1처리후,WISH세포중TIMP-1단백표체수평분별여0 ng/ml농도시비교,차이유통계학의의(P＜0.05).(2) MMP-9 mRNA급단백표체:경불동농도적TGF-β1(0、2、10、20 ng/ml)처리후,WISH세포중MMP-9 mRNA표체수평수TGF-β1농도적증가이강저,분별위1.325±0.056、0.987±0.081、0.610±0.034급0.347±0.023,기중2、10급20 ng/ml농도시MMP-9 mRNA표체수평분별여0 ng/ml농도시비교,차이유통계학의의(P＜0.05)；WISH세포중MMP-9단백표체수평수TGF-β1농도적증가이강저,분별위1.119±0.064、1.008±0.052、0.578±0.041급0.401±0.015,2、10급20 ng/ml농도시MMP-9단백적표체수평분별여0 ng/ml농도시비교,차이유통계학의의(P＜0.05).(3) NF-κB단백표체:경2、10、20 ng/ml농도시TGF-β1처리후,WISH세포중NF-κB단백적표체수평분별위1.116±0.045、0.796±0.041급0.359±0.021,분별여0 ng/ml농도시(1.423±0.065)비교,차이균유통계학의의(P＜0.05).결론 양막WISH세포중TGF-β1농도강저,가인기양막세포중TIMP-1 mRNA급단백표체수평하강,MMP-9 mRNA급단백표체수평승고,도치량자재양막조직중적비례실형,차여태막파렬적발생궤제유관；TGF-β1통과억제양막세포중NF-κB통로이조공MMP-9적표체,종이대태막파렬유일정적보호작용.
Objective To investigate the effect of transforming growth factor β1 (TGF-β1) on the expression of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9),tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1),nuclear factor kappa B(NF-κB) and the possible signalling pathways in human amniotic cells WISH.Methods The WISH cell line was cultured.WISH cells were added with TGF-β1 of different concentrations (0,2,10 and 20 ng/ml,respectively) for 24 hours.Then,reverse transcription (RT) PCR and western blotting were used to analyze the protein and mRNA expression of TIMP-1 and MMP-9; and the expression of NF-κB was analyzed by western blot.Results (1) The profile of TIMP-1 mRNA (0.413 ±0.036,0.623 ±0.058,1.392 ±0.124,1.387 ±0.102) in WISH cells elevated when the concentration of TGF-β1 increased (0,2,10,20 ng/ml).In accordance with TIMP-1 mRNA,the expression of TIMP-1 also elevated with the increase of TGF-β1 (0.357 ± 0.031,0.596 ± 0.048,1.243 ± 0.097 and 1.359 ± 0.121,respectively).And when 2,10 or 20 ng/ml of TGF-β1 was added,the TIMP-1 mRNA and protein were significantly higher than the TIMP-1 mRNA and protein when no TGF-β1 was added(P ＜ 0.05).(2)In contrast with TIMP-1,MMP-9 mRNA (1.325 ±0.056,0.987 ±0.081,0.610 ±0.034,0.347 ±0.023) in WISH cells decreased when the concentration of TGF-β1 increased (0,2,10,20 ng/ml).The MMP-9 protein (1.119 ±0.064,1.008 ±0.052,0.578 ±0.041,0.401 ±0.015) also decreased with the increase of TGF-β1.And when 2,10 or 20 ng/ml of TGF-β1 was added,the MMP-9 mRNA and protein were significantly lower than the MMP-9 mRNA and protein when no TGF-β1 was added (P ＜ 0.05).(3) The NF-κB protein (1.423 ±0.065,1.116 ± 0.045,0.796 ± 0.041,0.359 ± 0.021) was significandy reduced with the increase of TGF-β1 (0,2,10,20 ng/ml; P ＜ 0.05).Conclusions The mRNA and protein expression of TIMP-1 decreased when TGF-β1 was low in WISH cells,whereas those of MMP-9 elevated when TGF-β1 was low.The unbalance of TIMP-1 and MMP-9 was related to the pathology of the premature rupture of membrane.And the NF-κB singalling pathway might be an important mechanism in the regulation of TIMP-1 and MMP-9 system.
