中华口腔医学杂志
中華口腔醫學雜誌
중화구강의학잡지
Chinese Journal of Stomatology
2013年
7期
398-402
,共5页
紫单胞菌,龈%成骨细胞%碱性磷酸酶%骨向分化
紫單胞菌,齦%成骨細胞%堿性燐痠酶%骨嚮分化
자단포균,간%성골세포%감성린산매%골향분화
Porphyromonas gingivalis%Osteoblasts%Alkaline phosphatase%Osteogenic differentiation
目的 研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)W83超声提取物对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1)骨向分化相关蛋白表达的影响,探讨Pg超声提取物对细胞成骨功能的作用.方法 标准厌氧环境下培养PgW83,收集细菌沉淀,离心后制备细菌的超声提取物,然后以0(对照组)、10、100及1000 mg/L的质量浓度加入MC3T3-E1的成骨诱导分化培养基中,培养14 d后提取细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测细胞骨钙蛋白、骨涎蛋白、骨桥蛋白及骨粘连蛋白的表达改变,酶标仪法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达；培养21 d后茜素红染色观察MC3T3-E1矿化结节形成情况；以上实验均重复3次,应用SPSS 13.0统计软件对各组结果进行单因素方差分析,检验水准为双侧α =0.05.结果 Pg超声提取物作用于MC3T3E1 14 d后,100 mg/L实验组细胞表达骨粘连蛋白、骨钙蛋白的相对表达量(分别为0.141±0.023、0.625±0.451)均显著低于对照组(均为1.000 ±0.000)和10 mg/L组(分别为1.035 ±0.133、0.852±0.110)；1000 mg/L组细胞表达骨粘连蛋白、骨钙蛋白的相对表达量(分别为0.020±0.003、0.213±0.053)均显著低于对照组、10及100 mg/L组(P＜0.05),Pg超声提取物呈剂量依赖性显著下调骨粘连蛋白和骨钙蛋白的表达.1000 mg/L高浓度时,Pg超声提取物显著下调骨桥蛋白的表达(蛋白相对表达量为0.572±0.162),与对照组、10及100 mg/L实验组相比骨桥蛋白表达(分别为1.000±0.000、1.029±0.135、1.199±0.337)差异均有统计学意义(P＜0.05).Pg超声提取物不改变骨涎蛋白的表达,对照组、10、100及1000 mg/L组间骨涎蛋白的相对表达量(分别为1.000 ±0.000、0.831±0.182、0.897±0.115、0.778±0.235)差异无统计学意义(P＞0.05).Pg超声提取物抑制MC3T3-E1的ALP活性,其抑制作用随各实验组质量浓度的增加逐渐增强,10、100、1000 mg/L质量浓度组ALP活性[分别为(0.0140±0.0011)、(0.0057±0.0013)及(0.0020±0.0008) U/gprot]均显著低于对照组[(0.0275±0.0014) U/gprot](P＜0.05),同时Pg超声提取物作用于MC3T3-E1 21d后能明显抑制MC3T3-E1矿化结节的形成.结论 Pg超声提取物可以下调小鼠成骨细胞骨向分化蛋白的表达,抑制细胞的成骨功能.
目的 研究牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)W83超聲提取物對小鼠顱頂前骨細胞亞剋隆14(MC3T3-E1)骨嚮分化相關蛋白錶達的影響,探討Pg超聲提取物對細胞成骨功能的作用.方法 標準厭氧環境下培養PgW83,收集細菌沉澱,離心後製備細菌的超聲提取物,然後以0(對照組)、10、100及1000 mg/L的質量濃度加入MC3T3-E1的成骨誘導分化培養基中,培養14 d後提取細胞總蛋白,蛋白質印跡法檢測細胞骨鈣蛋白、骨涎蛋白、骨橋蛋白及骨粘連蛋白的錶達改變,酶標儀法檢測堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)的錶達；培養21 d後茜素紅染色觀察MC3T3-E1礦化結節形成情況；以上實驗均重複3次,應用SPSS 13.0統計軟件對各組結果進行單因素方差分析,檢驗水準為雙側α =0.05.結果 Pg超聲提取物作用于MC3T3E1 14 d後,100 mg/L實驗組細胞錶達骨粘連蛋白、骨鈣蛋白的相對錶達量(分彆為0.141±0.023、0.625±0.451)均顯著低于對照組(均為1.000 ±0.000)和10 mg/L組(分彆為1.035 ±0.133、0.852±0.110)；1000 mg/L組細胞錶達骨粘連蛋白、骨鈣蛋白的相對錶達量(分彆為0.020±0.003、0.213±0.053)均顯著低于對照組、10及100 mg/L組(P＜0.05),Pg超聲提取物呈劑量依賴性顯著下調骨粘連蛋白和骨鈣蛋白的錶達.1000 mg/L高濃度時,Pg超聲提取物顯著下調骨橋蛋白的錶達(蛋白相對錶達量為0.572±0.162),與對照組、10及100 mg/L實驗組相比骨橋蛋白錶達(分彆為1.000±0.000、1.029±0.135、1.199±0.337)差異均有統計學意義(P＜0.05).Pg超聲提取物不改變骨涎蛋白的錶達,對照組、10、100及1000 mg/L組間骨涎蛋白的相對錶達量(分彆為1.000 ±0.000、0.831±0.182、0.897±0.115、0.778±0.235)差異無統計學意義(P＞0.05).Pg超聲提取物抑製MC3T3-E1的ALP活性,其抑製作用隨各實驗組質量濃度的增加逐漸增彊,10、100、1000 mg/L質量濃度組ALP活性[分彆為(0.0140±0.0011)、(0.0057±0.0013)及(0.0020±0.0008) U/gprot]均顯著低于對照組[(0.0275±0.0014) U/gprot](P＜0.05),同時Pg超聲提取物作用于MC3T3-E1 21d後能明顯抑製MC3T3-E1礦化結節的形成.結論 Pg超聲提取物可以下調小鼠成骨細胞骨嚮分化蛋白的錶達,抑製細胞的成骨功能.
목적 연구아간계람단포균(Porphyromonas gingivalis,Pg)W83초성제취물대소서로정전골세포아극륭14(MC3T3-E1)골향분화상관단백표체적영향,탐토Pg초성제취물대세포성골공능적작용.방법 표준염양배경하배양PgW83,수집세균침정,리심후제비세균적초성제취물,연후이0(대조조)、10、100급1000 mg/L적질량농도가입MC3T3-E1적성골유도분화배양기중,배양14 d후제취세포총단백,단백질인적법검측세포골개단백、골연단백、골교단백급골점련단백적표체개변,매표의법검측감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)적표체；배양21 d후천소홍염색관찰MC3T3-E1광화결절형성정황；이상실험균중복3차,응용SPSS 13.0통계연건대각조결과진행단인소방차분석,검험수준위쌍측α =0.05.결과 Pg초성제취물작용우MC3T3E1 14 d후,100 mg/L실험조세포표체골점련단백、골개단백적상대표체량(분별위0.141±0.023、0.625±0.451)균현저저우대조조(균위1.000 ±0.000)화10 mg/L조(분별위1.035 ±0.133、0.852±0.110)；1000 mg/L조세포표체골점련단백、골개단백적상대표체량(분별위0.020±0.003、0.213±0.053)균현저저우대조조、10급100 mg/L조(P＜0.05),Pg초성제취물정제량의뢰성현저하조골점련단백화골개단백적표체.1000 mg/L고농도시,Pg초성제취물현저하조골교단백적표체(단백상대표체량위0.572±0.162),여대조조、10급100 mg/L실험조상비골교단백표체(분별위1.000±0.000、1.029±0.135、1.199±0.337)차이균유통계학의의(P＜0.05).Pg초성제취물불개변골연단백적표체,대조조、10、100급1000 mg/L조간골연단백적상대표체량(분별위1.000 ±0.000、0.831±0.182、0.897±0.115、0.778±0.235)차이무통계학의의(P＞0.05).Pg초성제취물억제MC3T3-E1적ALP활성,기억제작용수각실험조질량농도적증가축점증강,10、100、1000 mg/L질량농도조ALP활성[분별위(0.0140±0.0011)、(0.0057±0.0013)급(0.0020±0.0008) U/gprot]균현저저우대조조[(0.0275±0.0014) U/gprot](P＜0.05),동시Pg초성제취물작용우MC3T3-E1 21d후능명현억제MC3T3-E1광화결절적형성.결론 Pg초성제취물가이하조소서성골세포골향분화단백적표체,억제세포적성골공능.
Objective To investigate the effects of sonicated extracts of Porphyromonas gingivalis (Pg) on osteogenic differentiation of mouse osteoblast cell line MC3T3-E1.Methods PgW83 was cultured under standard anaerobic conditions and extracted by sonication.Mouse osteoblast cell line MC3T3-E1 was cultured with various concentrations of the extraction(0,10,100,1000 mg/L).Western blotting was applied to investigate the expression of osteocalcin(OC),bone sialoprotein(BSP),osteopo ntin(OPN)and osteonectin(ON).The activity of alkaline phosphatase (ALP) was detected by microplate reader after 14 days.Mineralization nodule formation was measured by alizarin red staining after 21 days.Results Compared with the control group,the extracts of Pg decreased OC and ON expression in a dose-dependent manner(OC relative expression:1.000 ± 0.000,0.852 ± 0.110,0.625 ± 0.451,0.213 ± 0.053),(ON relative expression:1.000 ± 0.000,1.035 ± 0.133,0.141 ± 0.023,0.020 ± 0.003) (P ＜ 0.05).The expression of OPN was down-regulated significantly in MC3T3-E1 treated with 1000 mg/L extraction (0.572 ± 0.162) compared with control group,10 and 100 mg/L (1.000 ± 0.000,1.029 ± 0.135,1.199 ± 0.337) (P ＜ 0.05).The expression of BSP remained unchanged when the cells were cultured with or without extraction (BSP relative expression:1.000 ± 0.000,0.831 ± 0.182,0.897 ± 0.115,0.778 ± 0.235) (P ＞0.05).Meanwhile,the extracts of Pg decreased ALP activity [control group:(0.0275 ±0.0014) U/gprot,10 mg/L:(0.0140 ±0.0011) U/gprot,100 mg/L:(0.0057 ±0.0013) U/gprot,1000 mg/L:(0.0020 ± 0.0008) U/gprot] (P ＜ 0.05) and reduced mineralization nodule formation.Conclusions The results suggest that Pg may inhibit osteoblasts'osteogenic function by down-regulation of osteogenic differentiation related proteins.
