中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2013年
2期
109-111
,共3页
宋芹芹%孙鹏%宋娟%盛琳君%张瑾%韩俊
宋芹芹%孫鵬%宋娟%盛琳君%張瑾%韓俊
송근근%손붕%송연%성림군%장근%한준
蛋白质工程%肽类%二聚作用
蛋白質工程%肽類%二聚作用
단백질공정%태류%이취작용
Protein engineering%Peptides%Dimerization
目的 探讨PrP蛋白和PrP106-126多肽对14-3-3蛋白二聚体形成的影响 方法 将重组表达纯化的0.25 μg、0.5 μg和1μg PrP蛋白、人工合成的PrP06-126肽分别与重组的14-3-3β共孵育,分别通过非变性聚丙烯酰胺凝胶的Western Blott检测PrP蛋白和PrP106-126肽对14-3-3β二聚体和多聚体的形成影响.将不同浓度的PrP与250 μmol/L的PrP106-126肽和14-3-3蛋白共孵育,检测PrP蛋白对PrP106-126肽对14-3-3β二聚体和多聚体的形成影响.随后,将200μmol/L、100 μmol/L、50 μmol/L的PrP106-126多肽分别作用于HeLa细胞8h后,检测细胞内的14-3-3二聚体形成.结果 PrP蛋白与14-3-3蛋白共孵育后,14-3-3二聚体和多聚体的信号随着PrP浓度的增加明显增强；PrP106-126多肽共孵育时,14-3-3二聚体和多聚体的信号随着PrP浓度的增加而减弱；不同浓度的PrP蛋白可以拮抗PrP106-126多肽对14-3-3β二聚体的形成.而且PrP106-126多肽可以干扰HeLa细胞中的二聚体形成.结论 PrP蛋白促进14-3-3二聚体的形成,而PrP106-126多肽干扰二聚体的形成,且PrP蛋白具有拮抗PrP106-126肽干扰14-3-3二聚体形成的作用.
目的 探討PrP蛋白和PrP106-126多肽對14-3-3蛋白二聚體形成的影響 方法 將重組錶達純化的0.25 μg、0.5 μg和1μg PrP蛋白、人工閤成的PrP06-126肽分彆與重組的14-3-3β共孵育,分彆通過非變性聚丙烯酰胺凝膠的Western Blott檢測PrP蛋白和PrP106-126肽對14-3-3β二聚體和多聚體的形成影響.將不同濃度的PrP與250 μmol/L的PrP106-126肽和14-3-3蛋白共孵育,檢測PrP蛋白對PrP106-126肽對14-3-3β二聚體和多聚體的形成影響.隨後,將200μmol/L、100 μmol/L、50 μmol/L的PrP106-126多肽分彆作用于HeLa細胞8h後,檢測細胞內的14-3-3二聚體形成.結果 PrP蛋白與14-3-3蛋白共孵育後,14-3-3二聚體和多聚體的信號隨著PrP濃度的增加明顯增彊；PrP106-126多肽共孵育時,14-3-3二聚體和多聚體的信號隨著PrP濃度的增加而減弱；不同濃度的PrP蛋白可以拮抗PrP106-126多肽對14-3-3β二聚體的形成.而且PrP106-126多肽可以榦擾HeLa細胞中的二聚體形成.結論 PrP蛋白促進14-3-3二聚體的形成,而PrP106-126多肽榦擾二聚體的形成,且PrP蛋白具有拮抗PrP106-126肽榦擾14-3-3二聚體形成的作用.
목적 탐토PrP단백화PrP106-126다태대14-3-3단백이취체형성적영향 방법 장중조표체순화적0.25 μg、0.5 μg화1μg PrP단백、인공합성적PrP06-126태분별여중조적14-3-3β공부육,분별통과비변성취병희선알응효적Western Blott검측PrP단백화PrP106-126태대14-3-3β이취체화다취체적형성영향.장불동농도적PrP여250 μmol/L적PrP106-126태화14-3-3단백공부육,검측PrP단백대PrP106-126태대14-3-3β이취체화다취체적형성영향.수후,장200μmol/L、100 μmol/L、50 μmol/L적PrP106-126다태분별작용우HeLa세포8h후,검측세포내적14-3-3이취체형성.결과 PrP단백여14-3-3단백공부육후,14-3-3이취체화다취체적신호수착PrP농도적증가명현증강；PrP106-126다태공부육시,14-3-3이취체화다취체적신호수착PrP농도적증가이감약；불동농도적PrP단백가이길항PrP106-126다태대14-3-3β이취체적형성.이차PrP106-126다태가이간우HeLa세포중적이취체형성.결론 PrP단백촉진14-3-3이취체적형성,이PrP106-126다태간우이취체적형성,차PrP단백구유길항PrP106-126태간우14-3-3이취체형성적작용.
Objective To investigate both PrP and PrP106-126 peptide effect on 14-3-3β dimeration.Methods 14-3-3β were incubated with different does recombinant PrP or PrP106-126 peptide,both 14-3-3β dimer and polymer were separated 15％ non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and the 14-3-3 dimers were evaluated using 14-3-3β-specific Western blotting.And then,14-3-3β dimeration buffer were incubated with different does recombinant PrP and 250 μmol/L PrP106-126 peptide,14-3-3β dimer and polymer were detected by above methods.Cellular 14-3-3 dimer were also detected after PrP106-126 peptide were added to HeLa cell for 8 hours.Results Recombinant full-length PrP facilitated the dimerization of 14-3-3β and PrP106-126 disturbed 14-3-3β dimeration as both have dose dependence effect.PrP antagonized PrP106-126-induced 14-3-3β dimer with PrP protein increase in vitro.Cellular 14-3-3 dimerization also decreased after treatment of peptide PrP106-126 on HeLa cells for 8 hours.Conculsion Dimerization process of 14-3-3β was promoted by full-length PrP (PrP23-231) but inhibited by peptide PrP106-126 in vitro.PrP agonized PrP106-126-induced inhibition of 14-3-3 dimeration.PrP106-126 inhibited cellular 14-3-3 dimerization.
