中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2013年
3期
484-486
,共3页
殷德涛%李明闯%王勇飞%郑丽丽%李红强%张艳%江金花%王庆端
慇德濤%李明闖%王勇飛%鄭麗麗%李紅彊%張豔%江金花%王慶耑
은덕도%리명틈%왕용비%정려려%리홍강%장염%강금화%왕경단
甲状腺乳头状癌%Dickkopf同源序列3基因%5-氮杂胞苷%去甲基化
甲狀腺乳頭狀癌%Dickkopf同源序列3基因%5-氮雜胞苷%去甲基化
갑상선유두상암%Dickkopf동원서렬3기인%5-담잡포감%거갑기화
Papillary thyroid carcinoma%Dickkopf homolog 3 gene%5-azacytidine%Demethylation
目的 观察甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azaC)对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1生长的抑制作用及对抑癌基因Dickkopf同源序列3(DDK3)的转录调节作用.方法 经2、5、10、20、50、100、200、400 μmol/L的5-azaC处理TPC-1细胞后,采用噻唑蓝(MTT)观察药物对细胞的生长抑制作用；以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞经5、10、20、50 μmol/L的5-azaC处理后DKK3基因mRNA的表达及DKK3基因甲基化状态.结果 经不同浓度5-azaC处理TPC-1细胞后,MTT检测到细胞的生长受到抑制,且呈时间和剂量依赖性(P＜0.05)；经5、10、20、50 μmol/L的5-azaC处理48 h后,DKK3 mRNA相对表达量分别为0.208±0.017、0.365±0.013、0.489±0.017、0.582±0.011,表达强度与5-azaC浓度呈剂量依赖关系(F=370.356,P＜0.01)；MSP检测结果显示,经5-azaC处理后,DKK3基因启动子高甲基化的区域发生去甲基化.结论 5-azaC能有效逆转TPC-1甲状腺乳头状癌细胞DKK3基因的异常甲基化,从而激活DKK3基因表达,抑制肿瘤细胞生长.
目的 觀察甲基化抑製劑5-氮雜胞苷(5-azaC)對甲狀腺乳頭狀癌細胞TPC-1生長的抑製作用及對抑癌基因Dickkopf同源序列3(DDK3)的轉錄調節作用.方法 經2、5、10、20、50、100、200、400 μmol/L的5-azaC處理TPC-1細胞後,採用噻唑藍(MTT)觀察藥物對細胞的生長抑製作用；以逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)、甲基化特異性PCR(MSP)檢測細胞經5、10、20、50 μmol/L的5-azaC處理後DKK3基因mRNA的錶達及DKK3基因甲基化狀態.結果 經不同濃度5-azaC處理TPC-1細胞後,MTT檢測到細胞的生長受到抑製,且呈時間和劑量依賴性(P＜0.05)；經5、10、20、50 μmol/L的5-azaC處理48 h後,DKK3 mRNA相對錶達量分彆為0.208±0.017、0.365±0.013、0.489±0.017、0.582±0.011,錶達彊度與5-azaC濃度呈劑量依賴關繫(F=370.356,P＜0.01)；MSP檢測結果顯示,經5-azaC處理後,DKK3基因啟動子高甲基化的區域髮生去甲基化.結論 5-azaC能有效逆轉TPC-1甲狀腺乳頭狀癌細胞DKK3基因的異常甲基化,從而激活DKK3基因錶達,抑製腫瘤細胞生長.
목적 관찰갑기화억제제5-담잡포감(5-azaC)대갑상선유두상암세포TPC-1생장적억제작용급대억암기인Dickkopf동원서렬3(DDK3)적전록조절작용.방법 경2、5、10、20、50、100、200、400 μmol/L적5-azaC처리TPC-1세포후,채용새서람(MTT)관찰약물대세포적생장억제작용；이역전록-취합매련반응(RT-PCR)、갑기화특이성PCR(MSP)검측세포경5、10、20、50 μmol/L적5-azaC처리후DKK3기인mRNA적표체급DKK3기인갑기화상태.결과 경불동농도5-azaC처리TPC-1세포후,MTT검측도세포적생장수도억제,차정시간화제량의뢰성(P＜0.05)；경5、10、20、50 μmol/L적5-azaC처리48 h후,DKK3 mRNA상대표체량분별위0.208±0.017、0.365±0.013、0.489±0.017、0.582±0.011,표체강도여5-azaC농도정제량의뢰관계(F=370.356,P＜0.01)；MSP검측결과현시,경5-azaC처리후,DKK3기인계동자고갑기화적구역발생거갑기화.결론 5-azaC능유효역전TPC-1갑상선유두상암세포DKK3기인적이상갑기화,종이격활DKK3기인표체,억제종류세포생장.
Objective To study the effects of 5-azacytidine (5-azaC),a methylation inhibitor,on the growth of thyroid papillary cancer-1 (TPC-1) papillary thyroid carcinoma cells and the transcription regulation of DNA guanine cytosine-phosphoric acid-motif (CpG) island demethylation on dickkopf homolog 3 (DKK3) tumor suppressor gene.Methods Methyl thiazol tetrazolium (MTT) method was used to detect the growth of TPC-1 cells after treated with 5-azaC (2,5,10,20,50,100,200 and 400 μmol/L).The expression of DKK3 mRNA and methylation status were examined by using methylation-specific polymerase chain reaction (MSP) and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) after TPC-1 cells treated with 5-azaC (5,10,20 and 50 μmol/L).Results 5-azaC reduced viability of TPC-1 cells in a dose-and time-dependent manner (P ＜0.05).After TPC-1 cells were treated with 5-azaC (5,10,20 and 50 μ mol/L) for 48 h,the relative expression of DKK3 mRNA was 0.208 ±0.017,0.365 ± 0.013,0.489 ± 0.017 and 0.582 ± 0.011 respectively,which was gradually increased in a dose-dependent manner (F =370.356,P ＜ 0.05).Meanwhile,DKK3 gene was demethylated partly in TPC-1 cells treated with 5-azaC.Conclusion 5-azaC might effectively cause the demethylation of DKK3 gene CpG-rich promoter regions,which may activate the expression of DKK3 gene and inhibit the growth of TPC-1 cells.
