中华肾脏病杂志
中華腎髒病雜誌
중화신장병잡지
2014年
9期
684-688
,共5页
汪雄攀%杨定平%杨定位%贾汝汉%丁国华%朱吉莉%简永红
汪雄攀%楊定平%楊定位%賈汝漢%丁國華%硃吉莉%簡永紅
왕웅반%양정평%양정위%가여한%정국화%주길리%간영홍
自噬%造影剂%足细胞%氧化应激
自噬%造影劑%足細胞%氧化應激
자서%조영제%족세포%양화응격
Autophagy%Contrast media%Podocytes%Oxidative stress
目的 研究自噬在造影剂诱导足细胞氧化应激损伤中的作用.方法 培养的小鼠永生化足细胞共分为6组:(1)正常对照(Con)组;(2)造影剂(CM)组;(3)雷帕霉素(Rap)组;(4)造影剂加雷帕霉素(CM+Rap)组;(5)3-甲基腺嘌呤(3-MA)组;(6)造影剂加3-甲基腺嘌呤(CM+3-MA)组,予以相应的刺激2h.观察自噬增强剂雷帕霉素与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对造影剂诱导的足细胞氧化应激及细胞活性的影响.Western印迹检测各组足细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1及氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达,丹酰戊二胺(MDC)染色检测足细胞内自噬体变化,采用氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯(CM-H2DCFDA)荧光染色检测足细胞内活性氧(ROS)水平,CCK8试剂盒检测细胞活性.结果 (1)造影剂抑制了足细胞内氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达,促进了细胞内ROS的生成,导致足细胞活性下降(均P＜ 0.05);(2)3-MA共处理足细胞后,细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达及自噬体生成均减少,氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达进一步减少,ROS生成进一步增加,导致足细胞活性下降更加显著(均P＜ 0.05);(3)雷帕霉素共处理足细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达及自噬体生成增加,氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达增强,ROS生成减少,促进了足细胞活性恢复(均P＜0.05).结论 自噬在造影剂诱导的足细胞氧化应激损伤起保护性作用,一定程度自噬上调可以减轻其氧化应激水平从而抑制足细胞损伤.
目的 研究自噬在造影劑誘導足細胞氧化應激損傷中的作用.方法 培養的小鼠永生化足細胞共分為6組:(1)正常對照(Con)組;(2)造影劑(CM)組;(3)雷帕黴素(Rap)組;(4)造影劑加雷帕黴素(CM+Rap)組;(5)3-甲基腺嘌呤(3-MA)組;(6)造影劑加3-甲基腺嘌呤(CM+3-MA)組,予以相應的刺激2h.觀察自噬增彊劑雷帕黴素與自噬抑製劑3-甲基腺嘌呤對造影劑誘導的足細胞氧化應激及細胞活性的影響.Western印跡檢測各組足細胞內自噬相關蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1及氧化應激相關蛋白Catalase、MnSOD的錶達,丹酰戊二胺(MDC)染色檢測足細胞內自噬體變化,採用氯甲基-2',7'-二氯二氫熒光素二乙酯(CM-H2DCFDA)熒光染色檢測足細胞內活性氧(ROS)水平,CCK8試劑盒檢測細胞活性.結果 (1)造影劑抑製瞭足細胞內氧化應激相關蛋白Catalase、MnSOD的錶達,促進瞭細胞內ROS的生成,導緻足細胞活性下降(均P＜ 0.05);(2)3-MA共處理足細胞後,細胞內自噬相關蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的錶達及自噬體生成均減少,氧化應激相關蛋白Catalase、MnSOD的錶達進一步減少,ROS生成進一步增加,導緻足細胞活性下降更加顯著(均P＜ 0.05);(3)雷帕黴素共處理足細胞後,自噬相關蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的錶達及自噬體生成增加,氧化應激相關蛋白Catalase、MnSOD的錶達增彊,ROS生成減少,促進瞭足細胞活性恢複(均P＜0.05).結論 自噬在造影劑誘導的足細胞氧化應激損傷起保護性作用,一定程度自噬上調可以減輕其氧化應激水平從而抑製足細胞損傷.
목적 연구자서재조영제유도족세포양화응격손상중적작용.방법 배양적소서영생화족세포공분위6조:(1)정상대조(Con)조;(2)조영제(CM)조;(3)뢰파매소(Rap)조;(4)조영제가뢰파매소(CM+Rap)조;(5)3-갑기선표령(3-MA)조;(6)조영제가3-갑기선표령(CM+3-MA)조,여이상응적자격2h.관찰자서증강제뢰파매소여자서억제제3-갑기선표령대조영제유도적족세포양화응격급세포활성적영향.Western인적검측각조족세포내자서상관단백LC3-Ⅱ、Beclin-1급양화응격상관단백Catalase、MnSOD적표체,단선무이알(MDC)염색검측족세포내자서체변화,채용록갑기-2',7'-이록이경형광소이을지(CM-H2DCFDA)형광염색검측족세포내활성양(ROS)수평,CCK8시제합검측세포활성.결과 (1)조영제억제료족세포내양화응격상관단백Catalase、MnSOD적표체,촉진료세포내ROS적생성,도치족세포활성하강(균P＜ 0.05);(2)3-MA공처리족세포후,세포내자서상관단백LC3-Ⅱ、Beclin-1적표체급자서체생성균감소,양화응격상관단백Catalase、MnSOD적표체진일보감소,ROS생성진일보증가,도치족세포활성하강경가현저(균P＜ 0.05);(3)뢰파매소공처리족세포후,자서상관단백LC3-Ⅱ、Beclin-1적표체급자서체생성증가,양화응격상관단백Catalase、MnSOD적표체증강,ROS생성감소,촉진료족세포활성회복(균P＜0.05).결론 자서재조영제유도적족세포양화응격손상기보호성작용,일정정도자서상조가이감경기양화응격수평종이억제족세포손상.
Objective To evaluate the effects of autophagy on oxidative stress induced by contrast media in podocytes.Methods The differentiated mouse podocytes were exposed to contrast media (Iopromide,50 mg/L)、rapamycin (Rap,autophagy enhancer,1 ng/L),3-methyladenine (3-MA,autophagy inhibitor,2 mmol/L) for 2 hours.The expression of autophagy protein LC3-Ⅱ and Beclin-1 as well as oxidative stress-related proteins Catalase,MnSOD were detected by Western blot.The formations of autophagy were observed by MDC staining,and the levels of reactive oxygen species (ROS) by CM-H2DCFDA staining.Cell activity was evaluated by CCK8 assay.Results Both the levels of oxidative stress and autophagy in podocytes increased when stimulated by contrast media,the expression of LC3-Ⅱ and Beclin-1 were enhanced,Catalase and MnSOD were inhibited (all P ＜ 0.05).Rapamycin increased the expression of Catalase,MnSOD and cell activity of podocytes,reduced the generation of ROS (all P ＜ 0.05),but in Rap group,cell activity showed no significant difference (P ＞ 0.05).3-MA decreased the expression of Catalase 、MnSOD and inhibited the cell activity of podocyte,increased the generation of ROS (all P ＜ 0.05).Conclusion Autophagy protects podocyte from contrast media by the means of reducing oxidative stress.
