中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2012年
7期
600-605
,共6页
冯若飞%张晓媛%林贵鸿%李明生%乔自林%凡静静%李向茸%张海霞%樊得英%马忠仁
馮若飛%張曉媛%林貴鴻%李明生%喬自林%凡靜靜%李嚮茸%張海霞%樊得英%馬忠仁
풍약비%장효원%림귀홍%리명생%교자림%범정정%리향용%장해하%번득영%마충인
乙型脑炎病毒%E蛋白基因%绿色荧光蛋白%真核表达
乙型腦炎病毒%E蛋白基因%綠色熒光蛋白%真覈錶達
을형뇌염병독%E단백기인%록색형광단백%진핵표체
Japanese encephalitis virus%E gene segment%Green fluorescent protein%Eukaryotic expression
目的 构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV,旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况,为进一步深入研究提供基础资料.方法 通过RT-PCR扩增目的基因,酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGFP-C1-JEV重组表达载体,利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞,观察绿色荧光标记蛋白表达情况,同时提取细胞RNA,检查目的基因转录表达情况,并利用免疫组化和Western blot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性.结果 重组质粒pEGFP-C1-JEV构建成功,转染至BHK-21细胞中,绿色荧光标记蛋白正常表达,表达率较高,RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达,表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中,且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合.结论 pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达,且对细胞生长和形态不产生影响,真核表达抗原具有良好的抗原性,本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料.
目的 構建乙腦病毒E蛋白基因片段的真覈錶達載體pEGFP-C1-JEV,旨在研究E蛋白基因在BHK-21細胞中的瞬時錶達情況,為進一步深入研究提供基礎資料.方法 通過RT-PCR擴增目的基因,酶切併重組後成功構建綠色熒光蛋白標記的pEGFP-C1-JEV重組錶達載體,利用脂質體介導將重組質粒轉染BHK-21細胞,觀察綠色熒光標記蛋白錶達情況,同時提取細胞RNA,檢查目的基因轉錄錶達情況,併利用免疫組化和Western blot法檢測目的基因錶達情況、錶達蛋白在細胞中的定位以及錶達蛋白抗原性.結果 重組質粒pEGFP-C1-JEV構建成功,轉染至BHK-21細胞中,綠色熒光標記蛋白正常錶達,錶達率較高,RT-PCR錶明目的基因在BHK-21正常轉錄併錶達,錶達蛋白主要分佈在BHK-21細胞的胞質和包膜中,且能與豚鼠抗JEV抗體特異性結閤.結論 pEGFP-C1-JEV質粒在BHK-21細胞中正常錶達,且對細胞生長和形態不產生影響,真覈錶達抗原具有良好的抗原性,本研究可為進一步探討乙型腦炎E蛋白基因體外真覈錶達及其功能和應用的研究提供基礎資料.
목적 구건을뇌병독E단백기인편단적진핵표체재체pEGFP-C1-JEV,지재연구E단백기인재BHK-21세포중적순시표체정황,위진일보심입연구제공기출자료.방법 통과RT-PCR확증목적기인,매절병중조후성공구건록색형광단백표기적pEGFP-C1-JEV중조표체재체,이용지질체개도장중조질립전염BHK-21세포,관찰록색형광표기단백표체정황,동시제취세포RNA,검사목적기인전록표체정황,병이용면역조화화Western blot법검측목적기인표체정황、표체단백재세포중적정위이급표체단백항원성.결과 중조질립pEGFP-C1-JEV구건성공,전염지BHK-21세포중,록색형광표기단백정상표체,표체솔교고,RT-PCR표명목적기인재BHK-21정상전록병표체,표체단백주요분포재BHK-21세포적포질화포막중,차능여돈서항JEV항체특이성결합.결론 pEGFP-C1-JEV질립재BHK-21세포중정상표체,차대세포생장화형태불산생영향,진핵표체항원구유량호적항원성,본연구가위진일보탐토을형뇌염E단백기인체외진핵표체급기공능화응용적연구제공기출자료.
Objective To research the molecular biology characteristics and transient expression in BHK-21 cells of E geue segment from Japanese encephalitis virus(JEV) and construct an eukaryotic expression vector pEGFP-C1-JEV.Methods E gene segment of JEV was amplified by RT-PCR,construct the recombinant vector pEGFP-C1-JEV,which could express EGFP label proteins.Transfect pEGFP-C1-JEV vector into BHK-21 via LipofectAMINETM 2000,to observe expressing of EGFP label protein and transcription of aim gene,and to check up localization and antigenicity of expressed E protein by Immunohistochemistry and Western blot.Results It showed that the recombinant plasmid pEGFP-C1-JEV was successfully constructed and transfected to BHK-21 cells,the normal expression of green fluorescent protein expression rate was higher.RT-PCR showed that gene transcription in BHK-21 and normal expression,expression protein was mainly distributed in the cytoplasm of BHK-21 cells and the envelope in,and can with guinea pig anti-JEV antibody binding.Conclusion pEGFP-C1-JEV vector in BHK-21 cells was normal expression and there were no effect on cell growth and morphology.Meanwhile,on eukaryotic antigens was good antigenicity.This research as a base foundation for E protein gene of JEV eukaryotic expression and function in vitro and applied research.
