中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2014年
4期
251-255
,共5页
血管中膜%肾机能不全,慢性%动脉硬化%RNA,小分子干扰%核心结合因子α1亚基
血管中膜%腎機能不全,慢性%動脈硬化%RNA,小分子榦擾%覈心結閤因子α1亞基
혈관중막%신궤능불전,만성%동맥경화%RNA,소분자간우%핵심결합인자α1아기
Tunica media%Renal insufficiency,chronic%Arteriosclerosis%RNA,small interfering%Core-binding factor α1
目的 研究核心结合因子α-1(Cbfα-1)基因沉默对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响.方法 体外原代培养大鼠VSMC.针对大鼠Cbfα-1基因设计合成4对候选小分子干扰RNA(siRNA)序列,以Lipo 2000为载体,转染体外培养的VSMC;FAM荧光标记siRNA优化转染条件.反转录(RT)-PCR检测Cbfα-1 mRNA表达,筛选有效siRNA序列.将有效siRNA序列转染VSMC,细胞分为4组:(1)正常磷组(1.3 mmol/L);(2)高磷组(2.6 mmol/L);(3)siRNA转染组:高磷+Cbfα-1-siRNA;(4)阴性转染对照组:高磷+阴性对照siRNA.RT-PCR和Western印迹法检测Cbfα-1、骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白表达;茜素红染色观察细胞钙盐沉积.结果 在Cbfα-1-siRNA浓度为100nmol/L、Lipo为8μl/孔转染条件下,转染效率约55％;筛选最佳干扰序列Cbfα-1 siRNA1952,转染24 h沉默效率可达81.8％.与高磷组相比,siRNA转染组Cbfα-1 mRNA表达在转染后24和48 h均明显低于高磷组(24 h:0.335 ±0.059比0.714 ±0.106,48 h:0.574 ±0.036比0.726±0.086,均P＜0.01);Cbfα-1蛋白表达在转染后48和72 h均显著低于高磷组(均P＜0.01),以48 h最明显.siRNA有效沉默Cbfα-1基因表达后,siRNA转染组OPN mRNA和蛋白的表达明显低于高磷组(均P＜0.05),且细胞钙盐沉积亦明显低于高磷组.结论 化学合成的Cbfα-1 siRNA可有效抑制VSMC Cbfα-1基因和蛋白的表达,从而抑制高磷诱导的VSMC成骨样转分化和细胞钙化.Cbfα-1可望成为CKD血管钙化治疗的靶点.
目的 研究覈心結閤因子α-1(Cbfα-1)基因沉默對高燐誘導的血管平滑肌細胞(VSMC)成骨樣分化和鈣化的影響.方法 體外原代培養大鼠VSMC.針對大鼠Cbfα-1基因設計閤成4對候選小分子榦擾RNA(siRNA)序列,以Lipo 2000為載體,轉染體外培養的VSMC;FAM熒光標記siRNA優化轉染條件.反轉錄(RT)-PCR檢測Cbfα-1 mRNA錶達,篩選有效siRNA序列.將有效siRNA序列轉染VSMC,細胞分為4組:(1)正常燐組(1.3 mmol/L);(2)高燐組(2.6 mmol/L);(3)siRNA轉染組:高燐+Cbfα-1-siRNA;(4)陰性轉染對照組:高燐+陰性對照siRNA.RT-PCR和Western印跡法檢測Cbfα-1、骨橋蛋白(OPN)基因和蛋白錶達;茜素紅染色觀察細胞鈣鹽沉積.結果 在Cbfα-1-siRNA濃度為100nmol/L、Lipo為8μl/孔轉染條件下,轉染效率約55％;篩選最佳榦擾序列Cbfα-1 siRNA1952,轉染24 h沉默效率可達81.8％.與高燐組相比,siRNA轉染組Cbfα-1 mRNA錶達在轉染後24和48 h均明顯低于高燐組(24 h:0.335 ±0.059比0.714 ±0.106,48 h:0.574 ±0.036比0.726±0.086,均P＜0.01);Cbfα-1蛋白錶達在轉染後48和72 h均顯著低于高燐組(均P＜0.01),以48 h最明顯.siRNA有效沉默Cbfα-1基因錶達後,siRNA轉染組OPN mRNA和蛋白的錶達明顯低于高燐組(均P＜0.05),且細胞鈣鹽沉積亦明顯低于高燐組.結論 化學閤成的Cbfα-1 siRNA可有效抑製VSMC Cbfα-1基因和蛋白的錶達,從而抑製高燐誘導的VSMC成骨樣轉分化和細胞鈣化.Cbfα-1可望成為CKD血管鈣化治療的靶點.
목적 연구핵심결합인자α-1(Cbfα-1)기인침묵대고린유도적혈관평활기세포(VSMC)성골양분화화개화적영향.방법 체외원대배양대서VSMC.침대대서Cbfα-1기인설계합성4대후선소분자간우RNA(siRNA)서렬,이Lipo 2000위재체,전염체외배양적VSMC;FAM형광표기siRNA우화전염조건.반전록(RT)-PCR검측Cbfα-1 mRNA표체,사선유효siRNA서렬.장유효siRNA서렬전염VSMC,세포분위4조:(1)정상린조(1.3 mmol/L);(2)고린조(2.6 mmol/L);(3)siRNA전염조:고린+Cbfα-1-siRNA;(4)음성전염대조조:고린+음성대조siRNA.RT-PCR화Western인적법검측Cbfα-1、골교단백(OPN)기인화단백표체;천소홍염색관찰세포개염침적.결과 재Cbfα-1-siRNA농도위100nmol/L、Lipo위8μl/공전염조건하,전염효솔약55％;사선최가간우서렬Cbfα-1 siRNA1952,전염24 h침묵효솔가체81.8％.여고린조상비,siRNA전염조Cbfα-1 mRNA표체재전염후24화48 h균명현저우고린조(24 h:0.335 ±0.059비0.714 ±0.106,48 h:0.574 ±0.036비0.726±0.086,균P＜0.01);Cbfα-1단백표체재전염후48화72 h균현저저우고린조(균P＜0.01),이48 h최명현.siRNA유효침묵Cbfα-1기인표체후,siRNA전염조OPN mRNA화단백적표체명현저우고린조(균P＜0.05),차세포개염침적역명현저우고린조.결론 화학합성적Cbfα-1 siRNA가유효억제VSMC Cbfα-1기인화단백적표체,종이억제고린유도적VSMC성골양전분화화세포개화.Cbfα-1가망성위CKD혈관개화치료적파점.
