中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2014年
9期
645-650
,共6页
杨振丽%李占稳%冯海凉%卞晓翠%刘艳艳%刘玉琴
楊振麗%李佔穩%馮海涼%卞曉翠%劉豔豔%劉玉琴
양진려%리점은%풍해량%변효취%류염염%류옥금
癌,非小细胞肺%PI3K%MEK%抑制剂%K-ras基因
癌,非小細胞肺%PI3K%MEK%抑製劑%K-ras基因
암,비소세포폐%PI3K%MEK%억제제%K-ras기인
Carcinoma,non-small-cell lung%PI3K%MEK%Inhibitor%K-ras gene
目的 观察RAS/MEK/ERK通路单独抑制或联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 常规培养A549细胞,分别以不同浓度的PI3K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合处理,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测抑制剂对细胞增殖的影响,根据MTT法检测结果确定联合给药的浓度.将A549细胞分为空白对照组、0.5 μmol/L GDC-0941处理组、低浓度联合组(0.5 μmol/L AZD6244+ 0.5μmol/LGDC-0941)、5.0 μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组(5.0 μmol/L AZD6244+ 5.0 μmol/L GDC-0941),采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,采用Western blot法检测抑制剂靶点下游与细胞周期和凋亡相关的蛋白表达.结果 AZD6244对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,但浓度平台出现时,增殖抑制率仅为25.5％.AZD6244联合GDC-0941对A549细胞的生长抑制作用增强,但联合用药的效果与两种抑制剂联合使用的浓度有关.0.5 μmol/L GDC-0941处理组和低浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为(20.70±0.99)％和(18.65±0.92)％,差异无统计学意义(P＞0.05);5.0μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为(37.85 ±3.18)％和(52.27±4.36)％,差异有统计学意义(P＜0.01).低浓度联合组A549细胞的细胞周期没有明显改变;高浓度联合组中G0/G1期细胞增加,S期细胞减少.单独使用AZD6244可明显抑制pERK的表达水平,但pAKT的表达增加.单独使用GDC-0941可明显抑制pAKT的表达水平,但pERK的表达增加.低浓度联合组中,细胞周期和凋亡蛋白的表达均没有发生明显改变;高浓度联合组中,cyclin D1、cyclin B1表达量受到抑制,PARP剪切增加,Bcl-2/Bax比值下降.结论 对于K-ras基因单突变的非小细胞肺癌A549细胞,单独使用一条信号通路的抑制剂会反馈性激活另一信号通路.RAS/MEK/ERK和PDK/AKT/mTOR两条通路的同时抑制呈协同作用,这种协调作用受到抑制剂浓度的影响.靶向治疗时,联合使用两条通路的抑制剂是必要的.
目的 觀察RAS/MEK/ERK通路單獨抑製或聯閤PI3K/AKT/mTOR通路抑製對非小細胞肺癌A549細胞增殖和凋亡的影響,併探討其相關分子機製.方法 常規培養A549細胞,分彆以不同濃度的PI3K抑製劑GDC-0941和MEK抑製劑AZD6244單獨或聯閤處理,採用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測抑製劑對細胞增殖的影響,根據MTT法檢測結果確定聯閤給藥的濃度.將A549細胞分為空白對照組、0.5 μmol/L GDC-0941處理組、低濃度聯閤組(0.5 μmol/L AZD6244+ 0.5μmol/LGDC-0941)、5.0 μmol/L GDC-0941處理組和高濃度聯閤組(5.0 μmol/L AZD6244+ 5.0 μmol/L GDC-0941),採用流式細胞術檢測細胞週期和凋亡,採用Western blot法檢測抑製劑靶點下遊與細胞週期和凋亡相關的蛋白錶達.結果 AZD6244對A549細胞的增殖抑製作用呈濃度依賴性,但濃度平檯齣現時,增殖抑製率僅為25.5％.AZD6244聯閤GDC-0941對A549細胞的生長抑製作用增彊,但聯閤用藥的效果與兩種抑製劑聯閤使用的濃度有關.0.5 μmol/L GDC-0941處理組和低濃度聯閤組A549細胞的凋亡率分彆為(20.70±0.99)％和(18.65±0.92)％,差異無統計學意義(P＞0.05);5.0μmol/L GDC-0941處理組和高濃度聯閤組A549細胞的凋亡率分彆為(37.85 ±3.18)％和(52.27±4.36)％,差異有統計學意義(P＜0.01).低濃度聯閤組A549細胞的細胞週期沒有明顯改變;高濃度聯閤組中G0/G1期細胞增加,S期細胞減少.單獨使用AZD6244可明顯抑製pERK的錶達水平,但pAKT的錶達增加.單獨使用GDC-0941可明顯抑製pAKT的錶達水平,但pERK的錶達增加.低濃度聯閤組中,細胞週期和凋亡蛋白的錶達均沒有髮生明顯改變;高濃度聯閤組中,cyclin D1、cyclin B1錶達量受到抑製,PARP剪切增加,Bcl-2/Bax比值下降.結論 對于K-ras基因單突變的非小細胞肺癌A549細胞,單獨使用一條信號通路的抑製劑會反饋性激活另一信號通路.RAS/MEK/ERK和PDK/AKT/mTOR兩條通路的同時抑製呈協同作用,這種協調作用受到抑製劑濃度的影響.靶嚮治療時,聯閤使用兩條通路的抑製劑是必要的.
목적 관찰RAS/MEK/ERK통로단독억제혹연합PI3K/AKT/mTOR통로억제대비소세포폐암A549세포증식화조망적영향,병탐토기상관분자궤제.방법 상규배양A549세포,분별이불동농도적PI3K억제제GDC-0941화MEK억제제AZD6244단독혹연합처리,채용사갑기우담서람(MTT)법검측억제제대세포증식적영향,근거MTT법검측결과학정연합급약적농도.장A549세포분위공백대조조、0.5 μmol/L GDC-0941처리조、저농도연합조(0.5 μmol/L AZD6244+ 0.5μmol/LGDC-0941)、5.0 μmol/L GDC-0941처리조화고농도연합조(5.0 μmol/L AZD6244+ 5.0 μmol/L GDC-0941),채용류식세포술검측세포주기화조망,채용Western blot법검측억제제파점하유여세포주기화조망상관적단백표체.결과 AZD6244대A549세포적증식억제작용정농도의뢰성,단농도평태출현시,증식억제솔부위25.5％.AZD6244연합GDC-0941대A549세포적생장억제작용증강,단연합용약적효과여량충억제제연합사용적농도유관.0.5 μmol/L GDC-0941처리조화저농도연합조A549세포적조망솔분별위(20.70±0.99)％화(18.65±0.92)％,차이무통계학의의(P＞0.05);5.0μmol/L GDC-0941처리조화고농도연합조A549세포적조망솔분별위(37.85 ±3.18)％화(52.27±4.36)％,차이유통계학의의(P＜0.01).저농도연합조A549세포적세포주기몰유명현개변;고농도연합조중G0/G1기세포증가,S기세포감소.단독사용AZD6244가명현억제pERK적표체수평,단pAKT적표체증가.단독사용GDC-0941가명현억제pAKT적표체수평,단pERK적표체증가.저농도연합조중,세포주기화조망단백적표체균몰유발생명현개변;고농도연합조중,cyclin D1、cyclin B1표체량수도억제,PARP전절증가,Bcl-2/Bax비치하강.결론 대우K-ras기인단돌변적비소세포폐암A549세포,단독사용일조신호통로적억제제회반궤성격활령일신호통로.RAS/MEK/ERK화PDK/AKT/mTOR량조통로적동시억제정협동작용,저충협조작용수도억제제농도적영향.파향치료시,연합사용량조통로적억제제시필요적.
Objective To evaluate the effect of combined targeting of MEK and PI3K signaling pathways on K-ras mutated non-small cell lung cancer cell line A549 cells and the relevant mechanisms.Methods A549 cells were treated with different concentrations of two inhibitors.Growth inhibition was determined by MTT assay.According to the results of MTT test,the cells were divided into four groups:the control group,PI3K inhibitor group (GDC-0941,0.5 and 5.0 μmol/L),combination group Ⅰ (0.5 μmol/L AZD6244 + 0.5 μmol/L GDC-0941) and combination group Ⅱ (5.0 μmol/L AZD6244 + 5.0 μmol/L GDC-0941).The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry.The expression of proteins related to apoptosis was tested with Western blot.Results Both GDC-0941 and AZD6244 inhibited the cell proliferation.The combination group Ⅱ led to a stronger growth inhibition.The combination group Ⅰshowed an antagonistic effect and combination group Ⅱ showed an additive or synergistic effect.Compared with the control group,the combination group Ⅰ led to reduced apoptotic rate [(20.70 ± 0.99) ％ vs.(18.65 ± 0.92) ％,P ＞ 0.05] ; Combination group Ⅱ exhibited enhanced apoptotic rate [(37.85 ± 3.18)％ vs.(52.27 ±4.36)％,P＜0.01].In addition,in the combination group Ⅱ,more A549 cells were arrested in G0/G1 phase and decreased S phase (P ＜ 0.01),due to the reduced expressions of CyclinD1 and Cyclin B1,the increased cleaved PARP and the diminished ratio of Bcl-2/Bax.Conclusions For single K-ras mutated NSCLC cell line A549 cells,combination of RAS/MEK/ERK and PI3K/AKT/mTOR inhibition showed synergistic effects depending on the drug doses.Double pathways targeted therapy may be beneficial for these patients.
