CAJ | 학술논문

目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD ,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体.方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV )IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc‐IRES.从手足口病重症患者分离 EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT‐PCR)技术分别扩增出EV71病毒的 P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体 pc‐IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落.结果通过重组质粒p‐IRES‐P1‐3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p‐IRES‐P1‐3CD构建成功.结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础.
목적통과극륭장도병독71형결구전체단백P1화비결구단백3CD ,구건공표체P1전체단백화비결구단백3CD적진핵쌍기인표체재체.방법설계합성뇌심기염병독(EMCV )IRES서렬적특이성인물,극륭지진핵표체재체pcDNA3.0상,명명위pc‐IRES.종수족구병중증환자분리 EV71병독주,경역전록취합매련식반응(RT‐PCR)기술분별확증출EV71병독적 P1전체단백구여3CD구적편단,병장기정향극륭지진핵표체재체 pc‐IRES재체중IRES서렬적상유화하유,수후전화도대장애희균DH5α중,최후경PCR화쌍매절감정전화균락.결과통과중조질립p‐IRES‐P1‐3CD진행매절화DNA서렬분석,중조진핵쌍기인표체재체p‐IRES‐P1‐3CD구건성공.결론성공구건공표체EV71병독P1전체단백화비결구단백3CD진핵쌍기인표체재체,저장위하일보제비기우DNA재체적EV71병독적류병독과립역묘타하기출.