基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2012年
5期
415-421
,共7页
蔡凤%李铁军%解彦刚%李德全
蔡鳳%李鐵軍%解彥剛%李德全
채봉%리철군%해언강%리덕전
巴斯德毕赤酵母%单链抗体%表达%速灭威%化学免疫特性
巴斯德畢赤酵母%單鏈抗體%錶達%速滅威%化學免疫特性
파사덕필적효모%단련항체%표체%속멸위%화학면역특성
选用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统表达特异性抗速灭威单链抗体(scFv)基因,以为速灭威特异性抗体的大量制备奠定基础.设计引物扩增阳性克隆 scFv 基因,亚克隆至表达载体 pPICZ琢 C,获得重组酵母表达质粒 pPICZ琢 C-scFv,线性化 pPICZ琢 C-scFv 并高效电转 P. pastoris (X-33),对转化子进行抗性梯度筛选得到一株高效表达的 X-33-Pp-SMW-12-6菌株.对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究.结果表明:P. pastoris-scFv 的质量接近其亲本 E. coli-scFv 的质量,X-33-Pp-SMW12-6在优化条件下的表达产量达28 mg/L,比未优化前的产量提高了约8 mg/L,经纯化后抗体纯度可达85%以上.因此,利用 P. pastoris 表达系统制备抗速灭威单链抗体比细菌表达系统更有效、更经济.
選用巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)繫統錶達特異性抗速滅威單鏈抗體(scFv)基因,以為速滅威特異性抗體的大量製備奠定基礎.設計引物擴增暘性剋隆 scFv 基因,亞剋隆至錶達載體 pPICZ琢 C,穫得重組酵母錶達質粒 pPICZ琢 C-scFv,線性化 pPICZ琢 C-scFv 併高效電轉 P. pastoris (X-33),對轉化子進行抗性梯度篩選得到一株高效錶達的 X-33-Pp-SMW-12-6菌株.對穫得的菌株先後進行錶達條件的優化、優化條件下的誘導錶達及單鏈抗體性質研究.結果錶明:P. pastoris-scFv 的質量接近其親本 E. coli-scFv 的質量,X-33-Pp-SMW12-6在優化條件下的錶達產量達28 mg/L,比未優化前的產量提高瞭約8 mg/L,經純化後抗體純度可達85%以上.因此,利用 P. pastoris 錶達繫統製備抗速滅威單鏈抗體比細菌錶達繫統更有效、更經濟.
선용파사덕필적효모(Pichia pastoris)계통표체특이성항속멸위단련항체(scFv)기인,이위속멸위특이성항체적대량제비전정기출.설계인물확증양성극륭 scFv 기인,아극륭지표체재체 pPICZ탁 C,획득중조효모표체질립 pPICZ탁 C-scFv,선성화 pPICZ탁 C-scFv 병고효전전 P. pastoris (X-33),대전화자진행항성제도사선득도일주고효표체적 X-33-Pp-SMW-12-6균주.대획득적균주선후진행표체조건적우화、우화조건하적유도표체급단련항체성질연구.결과표명:P. pastoris-scFv 적질량접근기친본 E. coli-scFv 적질량,X-33-Pp-SMW12-6재우화조건하적표체산량체28 mg/L,비미우화전적산량제고료약8 mg/L,경순화후항체순도가체85%이상.인차,이용 P. pastoris 표체계통제비항속멸위단련항체비세균표체계통경유효、경경제.
