基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2012年
5期
460-466
,共7页
李文品%廖玉才%黄涛%李和平
李文品%廖玉纔%黃濤%李和平
리문품%료옥재%황도%리화평
油菜(Brassica napus)%叶绿体%同源重组%多顺反子表达载体
油菜(Brassica napus)%葉綠體%同源重組%多順反子錶達載體
유채(Brassica napus)%협록체%동원중조%다순반자표체재체
根据拟南芥叶绿体基因组序列设计 PCR 引物,从我国甘蓝型油菜栽培品种 F4叶绿体基因组中克隆了长度为1.5 kb 的 trnI 和 trnA 2个基因序列,核酸序列分析表明它们与拟南芥基因的同源性高达94%和99%,这两个克隆的油菜叶绿体基因组序列 trnI 和 trnA 被用于构建叶绿体定点整合表达载体.利用烟草叶绿体基因强启动子 Prrn 和终止子 TpsbA,以及筛选标记基因 aadA 和目的基因 HSA,构建了多顺反子表达盒Prrn-aadA-HSA-TpsbA,将表达盒置于油菜叶绿体 trnI 和 trnA 序列之间,最后构建成油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体 pIPaHTA.酶切鉴定及序列分析证实,构建的表达载体具有预期的调控元件及结构,这为后期油菜叶绿体转化体系的建立奠定了基础.
根據擬南芥葉綠體基因組序列設計 PCR 引物,從我國甘藍型油菜栽培品種 F4葉綠體基因組中剋隆瞭長度為1.5 kb 的 trnI 和 trnA 2箇基因序列,覈痠序列分析錶明它們與擬南芥基因的同源性高達94%和99%,這兩箇剋隆的油菜葉綠體基因組序列 trnI 和 trnA 被用于構建葉綠體定點整閤錶達載體.利用煙草葉綠體基因彊啟動子 Prrn 和終止子 TpsbA,以及篩選標記基因 aadA 和目的基因 HSA,構建瞭多順反子錶達盒Prrn-aadA-HSA-TpsbA,將錶達盒置于油菜葉綠體 trnI 和 trnA 序列之間,最後構建成油菜葉綠體多順反子定點整閤錶達載體 pIPaHTA.酶切鑒定及序列分析證實,構建的錶達載體具有預期的調控元件及結構,這為後期油菜葉綠體轉化體繫的建立奠定瞭基礎.
근거의남개협록체기인조서렬설계 PCR 인물,종아국감람형유채재배품충 F4협록체기인조중극륭료장도위1.5 kb 적 trnI 화 trnA 2개기인서렬,핵산서렬분석표명타문여의남개기인적동원성고체94%화99%,저량개극륭적유채협록체기인조서렬 trnI 화 trnA 피용우구건협록체정점정합표체재체.이용연초협록체기인강계동자 Prrn 화종지자 TpsbA,이급사선표기기인 aadA 화목적기인 HSA,구건료다순반자표체합Prrn-aadA-HSA-TpsbA,장표체합치우유채협록체 trnI 화 trnA 서렬지간,최후구건성유채협록체다순반자정점정합표체재체 pIPaHTA.매절감정급서렬분석증실,구건적표체재체구유예기적조공원건급결구,저위후기유채협록체전화체계적건립전정료기출.
