中国肝脏病杂志(电子版)
中國肝髒病雜誌(電子版)
중국간장병잡지(전자판)
CHINESE JOURNAL OF LIVER DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2013年
1期
1-5
,共5页
董金玲%高萍%刘顺爱%王琦%张锦前%成军
董金玲%高萍%劉順愛%王琦%張錦前%成軍
동금령%고평%류순애%왕기%장금전%성군
肝炎,丙型%核心蛋白%病毒非结构蛋白质类%干扰素β%基因表达调控
肝炎,丙型%覈心蛋白%病毒非結構蛋白質類%榦擾素β%基因錶達調控
간염,병형%핵심단백%병독비결구단백질류%간우소β%기인표체조공
Hepatitis C%Core%Viral nonstructural proteins%Interferon-beta%Gene expression regulation
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)core、NS3、NS5A对内源性IFN-β表达的影响及其调控机制.方法将HCV core、NS3、NS5A表达载体pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A转染至HepG2细胞,验证蛋白表达之后,采用实时荧光定量PCR和Western blot及ELISA方法观察3种蛋白对IFN-βmRNA及蛋白水平表达的影响.构建IFN-β全长启动子报告基因表达载体,借助双萤虫素酶活性检测,探讨HCV core、NS3、NS5A对IFN-β转录水平的调控机制.结果 pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A在HepG2细胞中成功表达,与转染pcDNA3.1/myc-His空载体相比,pcDNA3.1/myc-His-NS3/NS5A过表达时,在mRNA及蛋白水平均能抑制HepG2细胞内IFN-β的表达,与转染空载体的对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05).双萤虫素酶活性检测显示,转染IFN-β全长启动子报告基因表达质粒后,与对照组相比,双萤虫素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05).pcDNA3.1/myc-His-core过表达时对IFN-β的表达无明显影响.结论HCV NS3/NS5A在mRNA及蛋白水平能抑制IFN-β表达,并通过其转录水平影响IFN-β表达, core对IFN-β的表达无明显影响.其具体调控机制有待进一步研究.
目的探討丙型肝炎病毒(HCV)core、NS3、NS5A對內源性IFN-β錶達的影響及其調控機製.方法將HCV core、NS3、NS5A錶達載體pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A轉染至HepG2細胞,驗證蛋白錶達之後,採用實時熒光定量PCR和Western blot及ELISA方法觀察3種蛋白對IFN-βmRNA及蛋白水平錶達的影響.構建IFN-β全長啟動子報告基因錶達載體,藉助雙螢蟲素酶活性檢測,探討HCV core、NS3、NS5A對IFN-β轉錄水平的調控機製.結果 pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A在HepG2細胞中成功錶達,與轉染pcDNA3.1/myc-His空載體相比,pcDNA3.1/myc-His-NS3/NS5A過錶達時,在mRNA及蛋白水平均能抑製HepG2細胞內IFN-β的錶達,與轉染空載體的對照組相比,差異有統計學意義(P <0.05).雙螢蟲素酶活性檢測顯示,轉染IFN-β全長啟動子報告基因錶達質粒後,與對照組相比,雙螢蟲素酶活性降低,差異有統計學意義(P<0.05).pcDNA3.1/myc-His-core過錶達時對IFN-β的錶達無明顯影響.結論HCV NS3/NS5A在mRNA及蛋白水平能抑製IFN-β錶達,併通過其轉錄水平影響IFN-β錶達, core對IFN-β的錶達無明顯影響.其具體調控機製有待進一步研究.
목적탐토병형간염병독(HCV)core、NS3、NS5A대내원성IFN-β표체적영향급기조공궤제.방법장HCV core、NS3、NS5A표체재체pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A전염지HepG2세포,험증단백표체지후,채용실시형광정량PCR화Western blot급ELISA방법관찰3충단백대IFN-βmRNA급단백수평표체적영향.구건IFN-β전장계동자보고기인표체재체,차조쌍형충소매활성검측,탐토HCV core、NS3、NS5A대IFN-β전록수평적조공궤제.결과 pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A재HepG2세포중성공표체,여전염pcDNA3.1/myc-His공재체상비,pcDNA3.1/myc-His-NS3/NS5A과표체시,재mRNA급단백수평균능억제HepG2세포내IFN-β적표체,여전염공재체적대조조상비,차이유통계학의의(P <0.05).쌍형충소매활성검측현시,전염IFN-β전장계동자보고기인표체질립후,여대조조상비,쌍형충소매활성강저,차이유통계학의의(P<0.05).pcDNA3.1/myc-His-core과표체시대IFN-β적표체무명현영향.결론HCV NS3/NS5A재mRNA급단백수평능억제IFN-β표체,병통과기전록수평영향IFN-β표체, core대IFN-β적표체무명현영향.기구체조공궤제유대진일보연구.
@@@@Objective To investigate the effects and regulation mechanism of HCV core/NS3/NS5A on expression of IFN-βin HepG2 cells. Methods HCV core/NS3/NS5A proteins were cloned (pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A) and expressed in HepG2 cells, then the expression level of IFN-β was detected by qRT-PCR, Western blot hybridization and ELISA. IFN-β promoter reporter vector (PGL4.10-IFN-β-P) was constructed and used for regulation mechanism study by luciferase assay. Results HCV core/NS3/NS5A proteins were successfully expressed in HepG2 cells post-transfection. Both the mRNA level and protein expression of IFN-βwere significantly decreased (P<0.05) in the presence of NS3/NS5A protein. Luciferase assay revealed that NS3/NS5A proteins downregulated IFN-βpromoter activity (P < 0.05). Meanwhile, HCV core protein had no significant effect on IFN-βexpression. Conclusions Overexpression of NS3/NS5A could inhibit the expression of IFN-βby downregulating IFN-βpromoter activity.
