北京农业
北京農業
북경농업
BEIJING AGRICULTURE
2012年
21期
8-11
,共4页
李春萍%佟铁铸%朱事康%刘星%周宇
李春萍%佟鐵鑄%硃事康%劉星%週宇
리춘평%동철주%주사강%류성%주우
IBV%S1蛋白%原核表达%单克隆抗体
IBV%S1蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
IBV%S1단백%원핵표체%단극륭항체
采用RT-PCR方法,以IBV M41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好.将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1.将该重组质粒转入表达菌Origami (DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34 KD的重组蛋白poly156S1.Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应.用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c 小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41 S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型.按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析.结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高.Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性.
採用RT-PCR方法,以IBV M41毒株的S1基因為模闆擴增齣瞭大小為468bp的目的片段(命名為poly156S1),該片斷保守性、抗原性較好.將穫得的目的基因定嚮剋隆到錶達載體pET-32a-c(+)中,穫得瞭重組質粒pET-32a-c(+)-poly156S1.將該重組質粒轉入錶達菌Origami (DE3)中,用IPTG進行誘導錶達,穫得瞭大小約為34 KD的重組蛋白poly156S1.Western-blot證實該重組蛋白能與IBV暘性鷄血清髮生特異性反應.用純化好的重組蛋白poly156S1免疫BALB/c 小鼠,按常規方法進行單剋隆抗體的製備,成功穫得瞭針對M41 S1蛋白的3株單剋隆雜交瘤細胞8D2、8D6、10F9,其IgG亞類分彆為IgG1、IgG2a、IgG2b,輕鏈均為κ型.按常規方法對各株單剋隆雜交瘤細胞進行瞭小鼠腹水單抗的製備與純化,併用以重組蛋白poly156S1為包被抗原的間接ELISA對純化後的腹水單抗進行瞭效價測定,及其與重組蛋白poly156S1親和力的分析.結果錶明:腹水單抗8D2、8D6、10F9的ELISA效價分彆達到1.78×218,1.37×221,1.31×216;單抗8D6與重組蛋白poly156S1的親和力最高.Western-blot進一步證實單抗8D6與重組蛋白poly156S1具有良好的反應性.
채용RT-PCR방법,이IBV M41독주적S1기인위모판확증출료대소위468bp적목적편단(명명위poly156S1),해편단보수성、항원성교호.장획득적목적기인정향극륭도표체재체pET-32a-c(+)중,획득료중조질립pET-32a-c(+)-poly156S1.장해중조질립전입표체균Origami (DE3)중,용IPTG진행유도표체,획득료대소약위34 KD적중조단백poly156S1.Western-blot증실해중조단백능여IBV양성계혈청발생특이성반응.용순화호적중조단백poly156S1면역BALB/c 소서,안상규방법진행단극륭항체적제비,성공획득료침대M41 S1단백적3주단극륭잡교류세포8D2、8D6、10F9,기IgG아류분별위IgG1、IgG2a、IgG2b,경련균위κ형.안상규방법대각주단극륭잡교류세포진행료소서복수단항적제비여순화,병용이중조단백poly156S1위포피항원적간접ELISA대순화후적복수단항진행료효개측정,급기여중조단백poly156S1친화력적분석.결과표명:복수단항8D2、8D6、10F9적ELISA효개분별체도1.78×218,1.37×221,1.31×216;단항8D6여중조단백poly156S1적친화력최고.Western-blot진일보증실단항8D6여중조단백poly156S1구유량호적반응성.
