分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2013年
1期
139-144
,共6页
胡凤荣*%王斐%王志强%任翠%鲍仁蕾
鬍鳳榮*%王斐%王誌彊%任翠%鮑仁蕾
호봉영*%왕비%왕지강%임취%포인뢰
风信子%ISSR-PCR%引物筛选
風信子%ISSR-PCR%引物篩選
풍신자%ISSR-PCR%인물사선
Hyacinth%ISSR-PCR%Primer selection
以风信子基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中Mg2+浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶的用量5个因素进行研究,建立了风信子ISSR-PCR扩增最佳反应体系,即:20μL反应体系中分别加入2μL 10×Buffer、1.4μL Mg2+(25 mmol/L)、1.5μL dNTPs (2.5 mmol/L)、1.5μL引物(10 pmol/μL),0.2μL Taq酶(5U/μL),1.2μL模板(30 ng/μL),ddH2O补足体积.并以此体系对110条引物进行筛选,最终获得了多态性高,重复性好的引物12条.
以風信子基因組DNA為ISSR-PCR擴增模闆,採用單因素試驗方法,對影響PCR擴增體繫中Mg2+濃度、dNTPs、模闆DNA及引物濃度、Taq酶的用量5箇因素進行研究,建立瞭風信子ISSR-PCR擴增最佳反應體繫,即:20μL反應體繫中分彆加入2μL 10×Buffer、1.4μL Mg2+(25 mmol/L)、1.5μL dNTPs (2.5 mmol/L)、1.5μL引物(10 pmol/μL),0.2μL Taq酶(5U/μL),1.2μL模闆(30 ng/μL),ddH2O補足體積.併以此體繫對110條引物進行篩選,最終穫得瞭多態性高,重複性好的引物12條.
이풍신자기인조DNA위ISSR-PCR확증모판,채용단인소시험방법,대영향PCR확증체계중Mg2+농도、dNTPs、모판DNA급인물농도、Taq매적용량5개인소진행연구,건립료풍신자ISSR-PCR확증최가반응체계,즉:20μL반응체계중분별가입2μL 10×Buffer、1.4μL Mg2+(25 mmol/L)、1.5μL dNTPs (2.5 mmol/L)、1.5μL인물(10 pmol/μL),0.2μL Taq매(5U/μL),1.2μL모판(30 ng/μL),ddH2O보족체적.병이차체계대110조인물진행사선,최종획득료다태성고,중복성호적인물12조.
Genomic DNA extracted from Hyacinth was used as template for ISSR-PCR, the impact factors in PCR system, Mg2+concentration, dNTPs, template DNA, primer concentration and Taq polymerase, were studied using a single factor experiment method by setting up different volume gradient to establish the hyacinth ISSR-PCR reaction system. The experiment results showed that the best reaction system was adding in turn with 2μL 10×Buffer, 1.4μL Mg2+(25 mmol/L), 1.5μL dNTPs (2.5 mmol/L), 1.5μL primer (10 pmol/μL), 0.2μL Taq polymerase (5 U/μL, 1.2μL template (30 ng/μL), and ddH2O to 20μL at last. According to this PCR system, 110 primers were selected, eventually thirteen primers showed high polymorphism and repeatability.
