CAJ | 학술논문

目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、espB、espD,构建3株突变株.方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增基因两翼的同源序列;将PCR产物插入pEASY-T1载体并测序,将测序正确的上、下游同源序列分步酶切,构建于pUC19-kan质粒上,经PCR获得两端同源序列中间嵌合卡那霉素抗性基因标记的线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术,敲除espA、espB、espD基因,之后转入pCP20质粒以去除抗性标记,最后测定突变株及野生菌株的生长曲线.结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、es?pB、espD,获得3株突变株,突变株与野生株的生长曲线相近.结论:为进一步研究espA、espB、espD基因在肠出血性大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用奠定了基础.
목적:이용Red중조계통고제장출혈성대장간균O157∶H7적독력기인espA、espB、espD,구건3주돌변주.방법:이장출혈성대장간균O157∶H7위모판,PCR확증기인량익적동원서렬;장PCR산물삽입pEASY-T1재체병측서,장측서정학적상、하유동원서렬분보매절,구건우pUC19-kan질립상,경PCR획득량단동원서렬중간감합잡나매소항성기인표기적선성편단,이용질립pKD46개도적중조기술,고제espA、espB、espD기인,지후전입pCP20질립이거제항성표기,최후측정돌변주급야생균주적생장곡선.결과:고제료장출혈성대장간균O157∶H7적독력기인espA、es?pB、espD,획득3주돌변주,돌변주여야생주적생장곡선상근.결론:위진일보연구espA、espB、espD기인재장출혈성대장간균O157∶H7치병과정중적작용전정료기출.