生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
5期
669-672
,共4页
孙卫国%李邦印%曹志红%熊志红%李国利%程小星
孫衛國%李邦印%曹誌紅%熊誌紅%李國利%程小星
손위국%리방인%조지홍%웅지홍%리국리%정소성
人白细胞介素-4%大肠杆菌二硫键异构酶%羟胺切割%包涵体%共复性
人白細胞介素-4%大腸桿菌二硫鍵異構酶%羥胺切割%包涵體%共複性
인백세포개소-4%대장간균이류건이구매%간알절할%포함체%공복성
目的:通过融合表达、羟胺切割、与二硫键异构酶共复性,获得高表达、高纯度、高生物活性的重组人白细胞介素-4(rhIL-4).方法:将5端引入了羟胺切割位点的hIL-4基因克隆到大肠杆菌二硫键异构酶DsbC的原核表达载体pET-DsbC中,IPTG诱导表达,对包涵体进行纯化,然后在变性条件下经羟胺切割,利用DsbC的分子伴侣功能与hIL-4进行共复性,最后利用阳离子交换层析纯化获得rhIL-4蛋白.结果:融合蛋白DsbC-hIL-4的表达量占细菌总蛋白的40%以上,以包涵体形式存在;纯化后得到的rhIL-4的相对分子量为15×103,与预期一致,电泳纯度达95%;细胞学实验测定其具有良好的生物学活性.结论:通过融合表达的方法可以提高hIL-4的原核表达量;利用共复性的方式极大地提高了hIL-4的复性率和生物活性.
目的:通過融閤錶達、羥胺切割、與二硫鍵異構酶共複性,穫得高錶達、高純度、高生物活性的重組人白細胞介素-4(rhIL-4).方法:將5耑引入瞭羥胺切割位點的hIL-4基因剋隆到大腸桿菌二硫鍵異構酶DsbC的原覈錶達載體pET-DsbC中,IPTG誘導錶達,對包涵體進行純化,然後在變性條件下經羥胺切割,利用DsbC的分子伴侶功能與hIL-4進行共複性,最後利用暘離子交換層析純化穫得rhIL-4蛋白.結果:融閤蛋白DsbC-hIL-4的錶達量佔細菌總蛋白的40%以上,以包涵體形式存在;純化後得到的rhIL-4的相對分子量為15×103,與預期一緻,電泳純度達95%;細胞學實驗測定其具有良好的生物學活性.結論:通過融閤錶達的方法可以提高hIL-4的原覈錶達量;利用共複性的方式極大地提高瞭hIL-4的複性率和生物活性.
목적:통과융합표체、간알절할、여이류건이구매공복성,획득고표체、고순도、고생물활성적중조인백세포개소-4(rhIL-4).방법:장5단인입료간알절할위점적hIL-4기인극륭도대장간균이류건이구매DsbC적원핵표체재체pET-DsbC중,IPTG유도표체,대포함체진행순화,연후재변성조건하경간알절할,이용DsbC적분자반려공능여hIL-4진행공복성,최후이용양리자교환층석순화획득rhIL-4단백.결과:융합단백DsbC-hIL-4적표체량점세균총단백적40%이상,이포함체형식존재;순화후득도적rhIL-4적상대분자량위15×103,여예기일치,전영순도체95%;세포학실험측정기구유량호적생물학활성.결론:통과융합표체적방법가이제고hIL-4적원핵표체량;이용공복성적방식겁대지제고료hIL-4적복성솔화생물활성.
