生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
5期
694-697
,共4页
谢文龙%骈亚亚%吴凯%郑玉玲%姜永强%陈福生
謝文龍%駢亞亞%吳凱%鄭玉玲%薑永彊%陳福生
사문룡%병아아%오개%정옥령%강영강%진복생
2型猪链球菌%Fbps基因%基因敲除
2型豬鏈毬菌%Fbps基因%基因敲除
2형저련구균%Fbps기인%기인고제
目的:敲除2型猪链球菌(SS2)强毒株05ZYH33中的Fbps基因,研究该基因敲除对菌株生物活性及毒力的影响,为深入探讨猪链球菌致病机制提供实验基础.方法:从05ZYH33基因组中扩增Fbps基因上、下游同源臂,从pSET1质粒中扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR的方法将3个片段整合后连接到温敏自杀载体pSET4s上,电转入05ZYH33感受态细胞,通过改变培养温度实现双交换和质粒丢失,最后经抗性筛选获得敲除株05ZYH33ΔFBPS,分析敲除株的生物学性状,以CD1小鼠作为体外感染模型对突变株和野生株进行毒力比较.结果:PCR分析和测序结果均显示Fbps基因敲除成功,动物实验结果显示Fbps基因敲除后05ZYH33的毒力有所下降.结论:与野生株相比,突变株对小鼠的毒力有所降低.
目的:敲除2型豬鏈毬菌(SS2)彊毒株05ZYH33中的Fbps基因,研究該基因敲除對菌株生物活性及毒力的影響,為深入探討豬鏈毬菌緻病機製提供實驗基礎.方法:從05ZYH33基因組中擴增Fbps基因上、下遊同源臂,從pSET1質粒中擴增氯黴素抗性基因Cm,通過重疊PCR的方法將3箇片段整閤後連接到溫敏自殺載體pSET4s上,電轉入05ZYH33感受態細胞,通過改變培養溫度實現雙交換和質粒丟失,最後經抗性篩選穫得敲除株05ZYH33ΔFBPS,分析敲除株的生物學性狀,以CD1小鼠作為體外感染模型對突變株和野生株進行毒力比較.結果:PCR分析和測序結果均顯示Fbps基因敲除成功,動物實驗結果顯示Fbps基因敲除後05ZYH33的毒力有所下降.結論:與野生株相比,突變株對小鼠的毒力有所降低.
목적:고제2형저련구균(SS2)강독주05ZYH33중적Fbps기인,연구해기인고제대균주생물활성급독력적영향,위심입탐토저련구균치병궤제제공실험기출.방법:종05ZYH33기인조중확증Fbps기인상、하유동원비,종pSET1질립중확증록매소항성기인Cm,통과중첩PCR적방법장3개편단정합후련접도온민자살재체pSET4s상,전전입05ZYH33감수태세포,통과개변배양온도실현쌍교환화질립주실,최후경항성사선획득고제주05ZYH33ΔFBPS,분석고제주적생물학성상,이CD1소서작위체외감염모형대돌변주화야생주진행독력비교.결과:PCR분석화측서결과균현시Fbps기인고제성공,동물실험결과현시Fbps기인고제후05ZYH33적독력유소하강.결론:여야생주상비,돌변주대소서적독력유소강저.
