CAJ | 학술논문

目的:建立适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法.方法:采用酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法、三氯乙酸-丙酮沉淀法和硫酸铵沉淀等3种方法制备水稻悬浮细胞外分泌蛋白,并进行双向电泳分析;利用Western印迹对候选方法提取的外分泌蛋白进行纯度检测.另外,还利用质谱技术对从双向电泳胶上随机挑选的9个蛋白点进行测定,并用SignalP 3.0 Server对测定的蛋白点进行信号肽预测.结果:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法提取的外分泌蛋白得率最高,且双向电泳图谱清晰,并能检测到最多的蛋白点;Western印迹表明利用该法所提取的外分泌蛋白未被细胞内蛋白质污染.利用质谱技术鉴定了随机挑选的9个蛋白点,SignalP 3.0 Server分析表明其中6个蛋白含有信号肽.结论:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法是一种适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法.
목적:건립괄용우쌍향전영분석적수도현부세포외분비단백제취방법.방법:채용분추제결합갑순작산안침정법、삼록을산-병동침정법화류산안침정등3충방법제비수도현부세포외분비단백,병진행쌍향전영분석;이용Western인적대후선방법제취적외분비단백진행순도검측.령외,환이용질보기술대종쌍향전영효상수궤도선적9개단백점진행측정,병용SignalP 3.0 Server대측정적단백점진행신호태예측.결과:분추제결합갑순작산안침정법제취적외분비단백득솔최고,차쌍향전영도보청석,병능검측도최다적단백점;Western인적표명이용해법소제취적외분비단백미피세포내단백질오염.이용질보기술감정료수궤도선적9개단백점,SignalP 3.0 Server분석표명기중6개단백함유신호태.결론:분추제결합갑순작산안침정법시일충괄용우쌍향전영분석적수도현부세포외분비단백제취방법.