CAJ | 학술논문

目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com(含有CTGF和TIMP-1),进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF +TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组(Com组,20±2%,P<0.05);在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF+TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%(P<0.05).结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高.
목적구건이대서CTGF화TIMP-1기인위파점적쌍중RNA간우표체재체질립,이검측기전염간성상세포적효솔.방법사선출대CTGF화TIMP-1기인최유효적RNA간우파위,각설계1대함유단발협결구적RNA 간우파점서렬,분별극륭도질립재체psiRNA-DUO-GFPzeo,구건함목적파기인편단적중조질립재체psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1화psiRNA-GFP-Com(함유CTGF화TIMP-1),진행매절화측서감정.장구건성공적중조질립psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1화psiRNA-GFP-Com전염대서간성상세포,재형광현미경하관찰질립전염정황,용류식세포의검측전염효솔.결과매절여측서결과제시중조질립 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1화psiRNA-GFP-Com성공구건;성공장중조질립psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1화psiRNA-GFP-Com전염간성상세포,재24소시,공질립조、CTGF조、TIMP-1조화CTGF +TIMP-1조전염효솔분별위15±2%、13±1%、15±1%화14±2%,균저우질립psiRNA-GFP-Com전염조(Com조,20±2%,P<0.05);재48소시,공질립조、CTGF조、TIMP-1조화CTGF+TIMP-1조전염효솔분별위10±2%、9±1%、8±2%화10±1%,균저우Com조적15±2%(P<0.05).결론성공구건파향대서CTGF화TIMP-1최유효적RNA간우파위적쌍중RNA간우표체질립,능전염지간성상세포,병차psiRNA-GFP-Com전염효솔최고.