中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
33期
6152-6157
,共6页
侯宁%袁文常%罗承锋%刘启才%罗健东
侯寧%袁文常%囉承鋒%劉啟纔%囉健東
후저%원문상%라승봉%류계재%라건동
过氧化物酶体增生因子活化受体α%重组腺病毒%心肌细胞%转染%能量代谢%基因治疗
過氧化物酶體增生因子活化受體α%重組腺病毒%心肌細胞%轉染%能量代謝%基因治療
과양화물매체증생인자활화수체α%중조선병독%심기세포%전염%능량대사%기인치료
背景:过氧化物酶体增生因子活化受体α是调节心脏脂肪酸氧化的重要核转录因子,利用基因工程技术构建其重组腺病毒载体对研究心脏能量代谢障碍机制具有重要意义.
目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体,评价其在原代培养的乳鼠心肌细胞中的表达效率.
方法:采用RT-PCR法自SD大鼠肝脏扩增过氧化物酶体增生因子活化受体α基因,将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒载体pAd-Track-CMV.线性化重组穿梭质粒载体并转化入含有腺病毒骨架质粒pAd-Easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒.用脂质体将线性化的重组腺病毒载体质粒转染于人胚肾293细胞以包装、扩增,纯化病毒后计算滴度.用纯化的重组腺病毒转染心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞过氧化物酶体增生因子活化受体α mRNA、蛋白表达.
结果与结论:成功构建携带大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为3.5×1011 pfu/L.重组腺病毒转染心肌细胞的效率达90%以上,被转染细胞目的基因mRNA、蛋白表达显著增高.该载体的成功构建为研究过氧化物酶体增生因子活化受体α基因在心肌能量代谢障碍中的作用奠定基础.
揹景:過氧化物酶體增生因子活化受體α是調節心髒脂肪痠氧化的重要覈轉錄因子,利用基因工程技術構建其重組腺病毒載體對研究心髒能量代謝障礙機製具有重要意義.
目的:構建大鼠過氧化物酶體增生因子活化受體α基因重組腺病毒載體,評價其在原代培養的乳鼠心肌細胞中的錶達效率.
方法:採用RT-PCR法自SD大鼠肝髒擴增過氧化物酶體增生因子活化受體α基因,將其剋隆至帶有增彊型綠色熒光蛋白的穿梭質粒載體pAd-Track-CMV.線性化重組穿梭質粒載體併轉化入含有腺病毒骨架質粒pAd-Easy-1的感受態大腸桿菌BJ5183構建重組腺病毒載體質粒.用脂質體將線性化的重組腺病毒載體質粒轉染于人胚腎293細胞以包裝、擴增,純化病毒後計算滴度.用純化的重組腺病毒轉染心肌細胞,熒光顯微鏡觀察轉染效率;熒光定量PCR、免疫印跡法檢測細胞過氧化物酶體增生因子活化受體α mRNA、蛋白錶達.
結果與結論:成功構建攜帶大鼠過氧化物酶體增生因子活化受體α基因的重組腺病毒載體,病毒滴度為3.5×1011 pfu/L.重組腺病毒轉染心肌細胞的效率達90%以上,被轉染細胞目的基因mRNA、蛋白錶達顯著增高.該載體的成功構建為研究過氧化物酶體增生因子活化受體α基因在心肌能量代謝障礙中的作用奠定基礎.
배경:과양화물매체증생인자활화수체α시조절심장지방산양화적중요핵전록인자,이용기인공정기술구건기중조선병독재체대연구심장능량대사장애궤제구유중요의의.
목적:구건대서과양화물매체증생인자활화수체α기인중조선병독재체,평개기재원대배양적유서심기세포중적표체효솔.
방법:채용RT-PCR법자SD대서간장확증과양화물매체증생인자활화수체α기인,장기극륭지대유증강형록색형광단백적천사질립재체pAd-Track-CMV.선성화중조천사질립재체병전화입함유선병독골가질립pAd-Easy-1적감수태대장간균BJ5183구건중조선병독재체질립.용지질체장선성화적중조선병독재체질립전염우인배신293세포이포장、확증,순화병독후계산적도.용순화적중조선병독전염심기세포,형광현미경관찰전염효솔;형광정량PCR、면역인적법검측세포과양화물매체증생인자활화수체α mRNA、단백표체.
결과여결론:성공구건휴대대서과양화물매체증생인자활화수체α기인적중조선병독재체,병독적도위3.5×1011 pfu/L.중조선병독전염심기세포적효솔체90%이상,피전염세포목적기인mRNA、단백표체현저증고.해재체적성공구건위연구과양화물매체증생인자활화수체α기인재심기능량대사장애중적작용전정기출.
