中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
34期
6313-6316
,共4页
赵刚%高雪%莫宏兵%平玉卓%刘可俗
趙剛%高雪%莫宏兵%平玉卓%劉可俗
조강%고설%막굉병%평옥탁%류가속
壳聚糖%MC3T3-E1细胞%骨形态发生蛋白2基因%转染%增殖
殼聚糖%MC3T3-E1細胞%骨形態髮生蛋白2基因%轉染%增殖
각취당%MC3T3-E1세포%골형태발생단백2기인%전염%증식
背景:目前应用生长因子进行基因治疗成为最有前途的研究领域之一.骨形态发生蛋白具有诱导间充质细胞向成骨细胞方向分化,进而诱导新骨形成的能力,在骨愈合过程中发挥着重要作用.
目的:选用MC3T3-E1细胞进行体外转染,以壳聚糖为输送载体将骨形态发生蛋白2导入MC3T3-E1细胞,以实现骨诱导蛋白的局部持续表达,促进细胞的增殖与分化.
方法:采用复凝聚法制备壳聚糖-骨形态发生蛋白2复合体,琼脂糖凝胶电泳检测壳聚糖结合骨形态发生蛋白2的能力.采用壳聚糖纳米颗粒载体转染技术,将携带有骨形态发生蛋白2基因的表达质粒导入成骨细胞中,评价转染效率,同时运用四氮唑盐法检测细胞增殖情况以及细胞内碱性磷酸酶活性.
结果与结论:电泳图显示壳聚糖能很好地结合骨形态发生蛋白2质粒;壳聚糖可成功将骨形态发生蛋白2目的基因导入成骨细胞,且转染率达35%左右;四氮唑盐法实验结果提示转染后可促进成骨细胞增殖;碱性磷酸酶结果显示细胞碱性磷酸酶活性增强.提示壳聚糖纳米粒载体系统成功耦联骨形态发生蛋白2目的基因并有效转染MC3T3-E1细胞,同时促进MC3T3-E1细胞的增殖与分化.
揹景:目前應用生長因子進行基因治療成為最有前途的研究領域之一.骨形態髮生蛋白具有誘導間充質細胞嚮成骨細胞方嚮分化,進而誘導新骨形成的能力,在骨愈閤過程中髮揮著重要作用.
目的:選用MC3T3-E1細胞進行體外轉染,以殼聚糖為輸送載體將骨形態髮生蛋白2導入MC3T3-E1細胞,以實現骨誘導蛋白的跼部持續錶達,促進細胞的增殖與分化.
方法:採用複凝聚法製備殼聚糖-骨形態髮生蛋白2複閤體,瓊脂糖凝膠電泳檢測殼聚糖結閤骨形態髮生蛋白2的能力.採用殼聚糖納米顆粒載體轉染技術,將攜帶有骨形態髮生蛋白2基因的錶達質粒導入成骨細胞中,評價轉染效率,同時運用四氮唑鹽法檢測細胞增殖情況以及細胞內堿性燐痠酶活性.
結果與結論:電泳圖顯示殼聚糖能很好地結閤骨形態髮生蛋白2質粒;殼聚糖可成功將骨形態髮生蛋白2目的基因導入成骨細胞,且轉染率達35%左右;四氮唑鹽法實驗結果提示轉染後可促進成骨細胞增殖;堿性燐痠酶結果顯示細胞堿性燐痠酶活性增彊.提示殼聚糖納米粒載體繫統成功耦聯骨形態髮生蛋白2目的基因併有效轉染MC3T3-E1細胞,同時促進MC3T3-E1細胞的增殖與分化.
배경:목전응용생장인자진행기인치료성위최유전도적연구영역지일.골형태발생단백구유유도간충질세포향성골세포방향분화,진이유도신골형성적능력,재골유합과정중발휘착중요작용.
목적:선용MC3T3-E1세포진행체외전염,이각취당위수송재체장골형태발생단백2도입MC3T3-E1세포,이실현골유도단백적국부지속표체,촉진세포적증식여분화.
방법:채용복응취법제비각취당-골형태발생단백2복합체,경지당응효전영검측각취당결합골형태발생단백2적능력.채용각취당납미과립재체전염기술,장휴대유골형태발생단백2기인적표체질립도입성골세포중,평개전염효솔,동시운용사담서염법검측세포증식정황이급세포내감성린산매활성.
결과여결론:전영도현시각취당능흔호지결합골형태발생단백2질립;각취당가성공장골형태발생단백2목적기인도입성골세포,차전염솔체35%좌우;사담서염법실험결과제시전염후가촉진성골세포증식;감성린산매결과현시세포감성린산매활성증강.제시각취당납미립재체계통성공우련골형태발생단백2목적기인병유효전염MC3T3-E1세포,동시촉진MC3T3-E1세포적증식여분화.
