中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
36期
6679-6684
,共6页
黄向辉%凌鸣%刘时璋%常彦海%董向辉%田昕
黃嚮輝%凌鳴%劉時璋%常彥海%董嚮輝%田昕
황향휘%릉명%류시장%상언해%동향휘%전흔
腺相关病毒%转化生长因子%高效感染%感染活性%骨髓基质干细胞%重组腺病毒%绿色荧光蛋白%感染滴度%骨髓来源干细胞%组织工程
腺相關病毒%轉化生長因子%高效感染%感染活性%骨髓基質榦細胞%重組腺病毒%綠色熒光蛋白%感染滴度%骨髓來源榦細胞%組織工程
선상관병독%전화생장인자%고효감염%감염활성%골수기질간세포%중조선병독%록색형광단백%감염적도%골수래원간세포%조직공정
背景:目前常用基因载体具有一定缺陷性,无法直接在体内应用.应用腺相关病毒作为转化生长因子β1载体促进软骨修复的研究报道较少.
目的:构建重组转化生长因子β1腺相关病毒,测定病毒滴度,并测定重组病毒对骨髓基质干细胞的感染活性.
方法:PCR方法扩增转化生长因子β1基因,构建重组骨架质粒pAAV-转化生长因子β1-绿色荧光蛋白,与包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper共转染AAV-293细胞包装重组腺相关病毒rAAV-转化生长因子β1-绿色荧光蛋白.应用该重组病毒感染AAV-HT1080细胞测定病毒滴度并鉴定.并感染体外培养的兔骨髓基质干细胞,检测重组病毒感染骨髓基质干细胞的效率及活性.
结果与结论:转化生长因子β1扩增产物测序结果正确,重组骨架质粒pAAV-转化生长因子β1-绿色荧光蛋白双酶切后可见位于1.3 Kb附近转化生长因子β1条带.收获病毒滴度5.2×1011 v.g/mL.鉴定重组病毒rAAV-转化生长因子β1-绿色荧光蛋白包装成功.重组病毒感染骨髓基质干细胞后可于荧光显微镜下观测到绿色荧光蛋白的表达,感染效率达42%.结果证实,成功构建重组腺相关病毒rAAV-转化生长因子β1-绿色荧光蛋白,能够高效感染兔骨髓基质干细胞.
揹景:目前常用基因載體具有一定缺陷性,無法直接在體內應用.應用腺相關病毒作為轉化生長因子β1載體促進軟骨脩複的研究報道較少.
目的:構建重組轉化生長因子β1腺相關病毒,測定病毒滴度,併測定重組病毒對骨髓基質榦細胞的感染活性.
方法:PCR方法擴增轉化生長因子β1基因,構建重組骨架質粒pAAV-轉化生長因子β1-綠色熒光蛋白,與包裝質粒pAAV-RC、輔助質粒pAAV-Helper共轉染AAV-293細胞包裝重組腺相關病毒rAAV-轉化生長因子β1-綠色熒光蛋白.應用該重組病毒感染AAV-HT1080細胞測定病毒滴度併鑒定.併感染體外培養的兔骨髓基質榦細胞,檢測重組病毒感染骨髓基質榦細胞的效率及活性.
結果與結論:轉化生長因子β1擴增產物測序結果正確,重組骨架質粒pAAV-轉化生長因子β1-綠色熒光蛋白雙酶切後可見位于1.3 Kb附近轉化生長因子β1條帶.收穫病毒滴度5.2×1011 v.g/mL.鑒定重組病毒rAAV-轉化生長因子β1-綠色熒光蛋白包裝成功.重組病毒感染骨髓基質榦細胞後可于熒光顯微鏡下觀測到綠色熒光蛋白的錶達,感染效率達42%.結果證實,成功構建重組腺相關病毒rAAV-轉化生長因子β1-綠色熒光蛋白,能夠高效感染兔骨髓基質榦細胞.
배경:목전상용기인재체구유일정결함성,무법직접재체내응용.응용선상관병독작위전화생장인자β1재체촉진연골수복적연구보도교소.
목적:구건중조전화생장인자β1선상관병독,측정병독적도,병측정중조병독대골수기질간세포적감염활성.
방법:PCR방법확증전화생장인자β1기인,구건중조골가질립pAAV-전화생장인자β1-록색형광단백,여포장질립pAAV-RC、보조질립pAAV-Helper공전염AAV-293세포포장중조선상관병독rAAV-전화생장인자β1-록색형광단백.응용해중조병독감염AAV-HT1080세포측정병독적도병감정.병감염체외배양적토골수기질간세포,검측중조병독감염골수기질간세포적효솔급활성.
결과여결론:전화생장인자β1확증산물측서결과정학,중조골가질립pAAV-전화생장인자β1-록색형광단백쌍매절후가견위우1.3 Kb부근전화생장인자β1조대.수획병독적도5.2×1011 v.g/mL.감정중조병독rAAV-전화생장인자β1-록색형광단백포장성공.중조병독감염골수기질간세포후가우형광현미경하관측도록색형광단백적표체,감염효솔체42%.결과증실,성공구건중조선상관병독rAAV-전화생장인자β1-록색형광단백,능구고효감염토골수기질간세포.
