中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
36期
6753-6757
,共5页
潘廷明%徐皓%陈建梅%宋晨阳%姚晓东
潘廷明%徐皓%陳建梅%宋晨暘%姚曉東
반정명%서호%진건매%송신양%요효동
趋化因子受体4%重组腺病毒%构建%鉴定%293细胞%载体
趨化因子受體4%重組腺病毒%構建%鑒定%293細胞%載體
추화인자수체4%중조선병독%구건%감정%293세포%재체
背景:目前研究发现,基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4轴具有介导骨髓间充质干细胞定向迁移的作用.目的:构建小鼠趋化因子受体4基因重组腺病毒载体.
方法:从C57BL/6小鼠中提取总RNA,以RT-PCR方法获得小鼠趋化因子受体4基因全长1080 bp的完整编码序列,通过穿梭质粒pAdTrack-CMV,将目的片段克隆入AdEasy-1腺病毒DNA中,获得重组腺病毒DNA,通过脂质体转染293细胞,经包装扩增后,获得重组腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4,并感染293细胞,PCR鉴定、Western blot检测蛋白表达.
结果与结论:含趋化因子受体4基因的重组腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4构建成功,经PCR鉴定鉴定重组病毒
中含有趋化因子受体4cDNA全长,经序列测定表明趋化因子受体4cDNA序列正确无丢失和错配现象,病毒滴度高, Western blot检测感染后293细胞趋化因子受体4的蛋白表达较未感染293细胞明显增加.
揹景:目前研究髮現,基質細胞衍生因子1/趨化因子受體4軸具有介導骨髓間充質榦細胞定嚮遷移的作用.目的:構建小鼠趨化因子受體4基因重組腺病毒載體.
方法:從C57BL/6小鼠中提取總RNA,以RT-PCR方法穫得小鼠趨化因子受體4基因全長1080 bp的完整編碼序列,通過穿梭質粒pAdTrack-CMV,將目的片段剋隆入AdEasy-1腺病毒DNA中,穫得重組腺病毒DNA,通過脂質體轉染293細胞,經包裝擴增後,穫得重組腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4,併感染293細胞,PCR鑒定、Western blot檢測蛋白錶達.
結果與結論:含趨化因子受體4基因的重組腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4構建成功,經PCR鑒定鑒定重組病毒
中含有趨化因子受體4cDNA全長,經序列測定錶明趨化因子受體4cDNA序列正確無丟失和錯配現象,病毒滴度高, Western blot檢測感染後293細胞趨化因子受體4的蛋白錶達較未感染293細胞明顯增加.
배경:목전연구발현,기질세포연생인자1/추화인자수체4축구유개도골수간충질간세포정향천이적작용.목적:구건소서추화인자수체4기인중조선병독재체.
방법:종C57BL/6소서중제취총RNA,이RT-PCR방법획득소서추화인자수체4기인전장1080 bp적완정편마서렬,통과천사질립pAdTrack-CMV,장목적편단극륭입AdEasy-1선병독DNA중,획득중조선병독DNA,통과지질체전염293세포,경포장확증후,획득중조선병독pAdTrack-CMV-CXCR4,병감염293세포,PCR감정、Western blot검측단백표체.
결과여결론:함추화인자수체4기인적중조선병독pAdTrack-CMV-CXCR4구건성공,경PCR감정감정중조병독
중함유추화인자수체4cDNA전장,경서렬측정표명추화인자수체4cDNA서렬정학무주실화착배현상,병독적도고, Western blot검측감염후293세포추화인자수체4적단백표체교미감염293세포명현증가.
