中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
37期
6897-6901
,共5页
董刚%郑建金%李涛%徐欣%卢恕来%吴鸿
董剛%鄭建金%李濤%徐訢%盧恕來%吳鴻
동강%정건금%리도%서흔%로서래%오홍
血管内皮生长因子%真核表达载体%基因克隆%基因扩增%基因转染
血管內皮生長因子%真覈錶達載體%基因剋隆%基因擴增%基因轉染
혈관내피생장인자%진핵표체재체%기인극륭%기인확증%기인전염
背景:血管内皮生长因子基因转染治疗组织损伤的研究倍受关注,构建稳定可靠的人血管内皮生长因子真核表达载体有重要意义.目的:克隆人血管内皮生长因子基因血管内皮生长因子165片段,构建 pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表达质粒,并验证其转染大鼠骨骼肌细胞的可靠性.方法:采用反转录-聚合酶链反应技术,从人卵巢癌患者外周血中提取并扩增出血管内皮生长因子165基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA4-HisMax-C真核表达载体上,构建成pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒,聚合酶链反应扩增,分别用酶切电泳分析和 DNA 测序的方法对提取和重组 DNA 进行鉴定.pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒转染骨骼肌细胞1周后反转录-聚合酶链反应提取血管内皮生长因子基因并酶切电泳鉴定.结果与结论:构建的重组质粒目的基因片段为人血管内皮生长因子165 cDNA,对大鼠骨骼肌细胞转染后检测到血管内皮生长因子165基因片段.提示成功地克隆了血管内皮生长因子165基因并构建了其真核表达质粒,能以此为载体转染至骨骼肌细胞,并已整合到骨骼肌的基因组参与转录,证明了其转染的有效性.
揹景:血管內皮生長因子基因轉染治療組織損傷的研究倍受關註,構建穩定可靠的人血管內皮生長因子真覈錶達載體有重要意義.目的:剋隆人血管內皮生長因子基因血管內皮生長因子165片段,構建 pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真覈錶達質粒,併驗證其轉染大鼠骨骼肌細胞的可靠性.方法:採用反轉錄-聚閤酶鏈反應技術,從人卵巢癌患者外週血中提取併擴增齣血管內皮生長因子165基因片段,通過DNA重組技術將該基因片段重組于pcDNA4-HisMax-C真覈錶達載體上,構建成pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重組質粒,聚閤酶鏈反應擴增,分彆用酶切電泳分析和 DNA 測序的方法對提取和重組 DNA 進行鑒定.pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重組質粒轉染骨骼肌細胞1週後反轉錄-聚閤酶鏈反應提取血管內皮生長因子基因併酶切電泳鑒定.結果與結論:構建的重組質粒目的基因片段為人血管內皮生長因子165 cDNA,對大鼠骨骼肌細胞轉染後檢測到血管內皮生長因子165基因片段.提示成功地剋隆瞭血管內皮生長因子165基因併構建瞭其真覈錶達質粒,能以此為載體轉染至骨骼肌細胞,併已整閤到骨骼肌的基因組參與轉錄,證明瞭其轉染的有效性.
배경:혈관내피생장인자기인전염치료조직손상적연구배수관주,구건은정가고적인혈관내피생장인자진핵표체재체유중요의의.목적:극륭인혈관내피생장인자기인혈관내피생장인자165편단,구건 pcDNA4-HisMax-C/VEGF165진핵표체질립,병험증기전염대서골격기세포적가고성.방법:채용반전록-취합매련반응기술,종인란소암환자외주혈중제취병확증출혈관내피생장인자165기인편단,통과DNA중조기술장해기인편단중조우pcDNA4-HisMax-C진핵표체재체상,구건성pcDNA4-HisMax-C/VEGF165중조질립,취합매련반응확증,분별용매절전영분석화 DNA 측서적방법대제취화중조 DNA 진행감정.pcDNA4-HisMax-C/VEGF165중조질립전염골격기세포1주후반전록-취합매련반응제취혈관내피생장인자기인병매절전영감정.결과여결론:구건적중조질립목적기인편단위인혈관내피생장인자165 cDNA,대대서골격기세포전염후검측도혈관내피생장인자165기인편단.제시성공지극륭료혈관내피생장인자165기인병구건료기진핵표체질립,능이차위재체전염지골격기세포,병이정합도골격기적기인조삼여전록,증명료기전염적유효성.
