中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
37期
6926-6930
,共5页
谢琳%巫国辉%李小林%文辉才
謝琳%巫國輝%李小林%文輝纔
사림%무국휘%리소림%문휘재
瘦素%重组%变性%复性%克隆%原核表达%抗原反应原性%RT-PCR%酶联免疫吸附%组织工程
瘦素%重組%變性%複性%剋隆%原覈錶達%抗原反應原性%RT-PCR%酶聯免疫吸附%組織工程
수소%중조%변성%복성%극륭%원핵표체%항원반응원성%RT-PCR%매련면역흡부%조직공정
背景:瘦素的功能是作为脂肪细胞体脂量的信号来认识的,作为体内的能量平衡信号反馈到下丘脑,与其中各部位神经元的受体结合后参与调节进食、饮水、能量代谢.目的:构建原核重组表达载体pET-32a-瘦素并检测其在大肠杆菌BL21中的高效表达.方法:取人脂肪组织,RT-PCR法制备瘦素目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pMD18T与pET-32a原核表达载体,双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌BL21株诱导其表达,SDS-PAGE电泳分离鉴定,表达产物变性复性后,间接酶联免疫吸附法检测抗原反应原性.结果与结论:实验成功扩增出520 bp 的瘦素目的基因并构建了原核重组表达载体 pET-32a-瘦素;测序结果与GenBank收录序列相一致;目的蛋白pET-32a-瘦素呈极高效表达,占总蛋白的50%以上;变性复性后抗原反应原性较复性前明显提高(P<0.01).结果证实,实验成功构建原核重组高效表达的载体pET-32a-瘦素,并提高其抗原反应原性.
揹景:瘦素的功能是作為脂肪細胞體脂量的信號來認識的,作為體內的能量平衡信號反饋到下丘腦,與其中各部位神經元的受體結閤後參與調節進食、飲水、能量代謝.目的:構建原覈重組錶達載體pET-32a-瘦素併檢測其在大腸桿菌BL21中的高效錶達.方法:取人脂肪組織,RT-PCR法製備瘦素目的基因,採用DNA重組技術將其剋隆至pMD18T與pET-32a原覈錶達載體,雙酶切及測序鑒定,轉化大腸桿菌BL21株誘導其錶達,SDS-PAGE電泳分離鑒定,錶達產物變性複性後,間接酶聯免疫吸附法檢測抗原反應原性.結果與結論:實驗成功擴增齣520 bp 的瘦素目的基因併構建瞭原覈重組錶達載體 pET-32a-瘦素;測序結果與GenBank收錄序列相一緻;目的蛋白pET-32a-瘦素呈極高效錶達,佔總蛋白的50%以上;變性複性後抗原反應原性較複性前明顯提高(P<0.01).結果證實,實驗成功構建原覈重組高效錶達的載體pET-32a-瘦素,併提高其抗原反應原性.
배경:수소적공능시작위지방세포체지량적신호래인식적,작위체내적능량평형신호반궤도하구뇌,여기중각부위신경원적수체결합후삼여조절진식、음수、능량대사.목적:구건원핵중조표체재체pET-32a-수소병검측기재대장간균BL21중적고효표체.방법:취인지방조직,RT-PCR법제비수소목적기인,채용DNA중조기술장기극륭지pMD18T여pET-32a원핵표체재체,쌍매절급측서감정,전화대장간균BL21주유도기표체,SDS-PAGE전영분리감정,표체산물변성복성후,간접매련면역흡부법검측항원반응원성.결과여결론:실험성공확증출520 bp 적수소목적기인병구건료원핵중조표체재체 pET-32a-수소;측서결과여GenBank수록서렬상일치;목적단백pET-32a-수소정겁고효표체,점총단백적50%이상;변성복성후항원반응원성교복성전명현제고(P<0.01).결과증실,실험성공구건원핵중조고효표체적재체pET-32a-수소,병제고기항원반응원성.
