CAJ | 학술논문

背景:次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC/CCL21)是近年来发现的,具有免疫调节作用及抗肿瘤活性.目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达重组蛋白.方法:取C57BL/6小鼠淋巴结细胞,体外用Poly(I:C)刺激后提取RNA并反转录,以此cDNA为模板,通过PCR技术扩增出CCL21成熟蛋白编码序列.克隆入原核表达载体pBEn-SBP-SET1a,构建融合表达载体pBEn-CCL21.将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导后TRICINE-SDS-PAGE电泳分析和鉴定重组蛋白的表达.CCL21融合蛋白经链霉亲和柱层析纯化.结果与结论:实验成功构建了CCL21基因的原核表达载体pBEn-CCL21,并获得相应的融合蛋白.结果显示CCL21可在大肠杆菌中高效表达,经链霉亲和柱层析纯化即可获得CCL21重组目的蛋白.
배경:차급림파조직추화인자(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC/CCL21)시근년래발현적,구유면역조절작용급항종류활성.목적:구건소서차급림파조직추화인자원핵표체재체,병재대장간균중고효표체중조단백.방법:취C57BL/6소서림파결세포,체외용Poly(I:C)자격후제취RNA병반전록,이차cDNA위모판,통과PCR기술확증출CCL21성숙단백편마서렬.극륭입원핵표체재체pBEn-SBP-SET1a,구건융합표체재체pBEn-CCL21.장표체재체전화대장간균BL21(DE3),경이병기-β-D-류대필남반유당감유도후TRICINE-SDS-PAGE전영분석화감정중조단백적표체.CCL21융합단백경련매친화주층석순화.결과여결론:실험성공구건료CCL21기인적원핵표체재체pBEn-CCL21,병획득상응적융합단백.결과현시CCL21가재대장간균중고효표체,경련매친화주층석순화즉가획득CCL21중조목적단백.