CAJ | 학술논문

目的基于多重PCR技术,建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亚群的基因芯片分型和检测方法.方法根据NCBI已收录的ALV三个亚群的参考毒株cDNA序列,在各亚群特异性基因突变区两端选取其保守区域,设计合成三个亚群的通用上游引物1条,以及B、E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各1条,将上述引物用Cy3标记,建立多重PCR体系;参考靶序列内部的三个亚群各自的保守区域,选择亚群之间基因突变位点多的区域,设计合成5条寡核苷酸探针,制作寡核苷酸探针基因检测芯片;以寄主细胞DF-1中提取传代ALV的cDNA,以及合成NCBI收录的各亚群参考毒株的cDNA序列作为检测模板;利用Cy3标记的PCR扩增产物,与基因芯片进行杂交反应,扫描结果.结果芯片准确检测并分型三个亚群的参考毒株,其检测灵敏度能够达到102个基因拷贝,且与禽类常见的四种病毒均无交叉反应.结论本研究结果证明,基因芯片技术是一种ALV的B、E和J亚群进行检测和分型的有效方法,且具有较高的特异性和灵敏度,为今后在临床应用中快速鉴别诊断ALV等免疫抑制病提供可行性
목적기우다중PCR기술,건립금백혈병병독(ALV)적B、E、J아군적기인심편분형화검측방법.방법근거NCBI이수록적ALV삼개아군적삼고독주cDNA서렬,재각아군특이성기인돌변구량단선취기보수구역,설계합성삼개아군적통용상유인물1조,이급B、E아군적통용하유인물화J아군하유인물각1조,장상술인물용Cy3표기,건립다중PCR체계;삼고파서렬내부적삼개아군각자적보수구역,선택아군지간기인돌변위점다적구역,설계합성5조과핵감산탐침,제작과핵감산탐침기인검측심편;이기주세포DF-1중제취전대ALV적cDNA,이급합성NCBI수록적각아군삼고독주적cDNA서렬작위검측모판;이용Cy3표기적PCR확증산물,여기인심편진행잡교반응,소묘결과.결과심편준학검측병분형삼개아군적삼고독주,기검측령민도능구체도102개기인고패,차여금류상견적사충병독균무교차반응.결론본연구결과증명,기인심편기술시일충ALV적B、E화J아군진행검측화분형적유효방법,차구유교고적특이성화령민도,위금후재림상응용중쾌속감별진단ALV등면역억제병제공가행성