CAJ | 학술논문

目的建立实时SYBRGreenI定量RTPCR检测人TIM1和TIM3mRNA的方法.方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM1和TIM3的cDNA,将将纯化的人TIM1和TIM3的扩增产物分别与pMD18TSimple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析.纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验.结果建立了TIM1和TIM3基因基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为103-107拷贝.阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性相关系数分别为1.00和1.00,扩增效率分别为1.070和1.023,批内及批间变异系数<5%.熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰.结论我们成功建立检测人TIM1和TIM3的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究人TIM1和TIM3功能奠定基础.
목적건립실시SYBRGreenI정량RTPCR검측인TIM1화TIM3mRNA적방법.방법종인외주혈단개핵세포제취적총RNA중역전록확증인TIM1화TIM3적cDNA,장장순화적인TIM1화TIM3적확증산물분별여pMD18TSimple재체진행련접,전화숙주균DH5α,제취중조질립DNA,PCR감정병측서분석.순화질립병검측260nm흡광치,학정중조질립원액적고패농도병이차제비형광정량PCR제도농도표준품,진행실시형광정량PCR실험.결과건립료TIM1화TIM3기인기인mRNA표체실시형광정량PCR검측방법,검측령민도체103고패,선성범위위103-107고패.역치순배수(Ct)여PCR체계중기시모판량적대수치지간유착량호적선성관계,선성상관계수분별위1.00화1.00,확증효솔분별위1.070화1.023,비내급비간변이계수<5%.용해곡선분석표명,산물위특이적단봉.결론아문성공건립검측인TIM1화TIM3적실시형광정량PCR방법,위진일보연구인TIM1화TIM3공능전정기출.