中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2012年
11期
1972-1975
,共4页
王磊%程鹤香%赵倩%陈鸥%赵明
王磊%程鶴香%趙倩%陳鷗%趙明
왕뢰%정학향%조천%진구%조명
线粒体DNA%无线粒体喉癌细胞系%溴化乙锭%细胞培养
線粒體DNA%無線粒體喉癌細胞繫%溴化乙錠%細胞培養
선립체DNA%무선립체후암세포계%추화을정%세포배양
目的为了研究线粒体DNA在人喉癌细胞的增殖、分化及凋亡中的影响及作用,培养线粒体DNA缺失的喉癌细胞系,为构建融合喉癌细胞,研究线粒体DNA突变和线粒体功能改变与喉癌发生之间的关系奠定基础.方法人喉癌细胞系JHUo11加入10%FBS的RPMI1640培养基中,然后在培养基中加入丙酮酸、尿苷、溴化乙锭(EtBr)以去除线粒体DNA,不加溴化乙锭的o11细胞作为对照.经过90天培养,线粒体DNA缺失的喉癌细胞通过健那绿染色后光镜观察和PCR法鉴定.结果 o11细胞经过75ng/μl溴化乙锭持续作用90天后可见细胞肿胀变圆,透光度增加,线粒体DNAPCR扩增未见目的条带,细胞可扩增出定位于mtDNA的500bp片段,健那绿染色对照细胞,可见散在蓝绿色线粒体,而加EB的细胞未见线粒体.结论喉癌细胞o11经过溴化乙锭持续作用90天培养出线粒体DNA缺失的ρ0o11喉癌细胞,这种缺失线粒体DNA的细胞系需补充外源性丙酮酸和尿苷来维持其生存,否则细胞很快死亡.通过观察细胞的增殖和分化发现,ρ0o11细胞生长速度比未经EB处理的对照组慢的多.
目的為瞭研究線粒體DNA在人喉癌細胞的增殖、分化及凋亡中的影響及作用,培養線粒體DNA缺失的喉癌細胞繫,為構建融閤喉癌細胞,研究線粒體DNA突變和線粒體功能改變與喉癌髮生之間的關繫奠定基礎.方法人喉癌細胞繫JHUo11加入10%FBS的RPMI1640培養基中,然後在培養基中加入丙酮痠、尿苷、溴化乙錠(EtBr)以去除線粒體DNA,不加溴化乙錠的o11細胞作為對照.經過90天培養,線粒體DNA缺失的喉癌細胞通過健那綠染色後光鏡觀察和PCR法鑒定.結果 o11細胞經過75ng/μl溴化乙錠持續作用90天後可見細胞腫脹變圓,透光度增加,線粒體DNAPCR擴增未見目的條帶,細胞可擴增齣定位于mtDNA的500bp片段,健那綠染色對照細胞,可見散在藍綠色線粒體,而加EB的細胞未見線粒體.結論喉癌細胞o11經過溴化乙錠持續作用90天培養齣線粒體DNA缺失的ρ0o11喉癌細胞,這種缺失線粒體DNA的細胞繫需補充外源性丙酮痠和尿苷來維持其生存,否則細胞很快死亡.通過觀察細胞的增殖和分化髮現,ρ0o11細胞生長速度比未經EB處理的對照組慢的多.
목적위료연구선립체DNA재인후암세포적증식、분화급조망중적영향급작용,배양선립체DNA결실적후암세포계,위구건융합후암세포,연구선립체DNA돌변화선립체공능개변여후암발생지간적관계전정기출.방법인후암세포계JHUo11가입10%FBS적RPMI1640배양기중,연후재배양기중가입병동산、뇨감、추화을정(EtBr)이거제선립체DNA,불가추화을정적o11세포작위대조.경과90천배양,선립체DNA결실적후암세포통과건나록염색후광경관찰화PCR법감정.결과 o11세포경과75ng/μl추화을정지속작용90천후가견세포종창변원,투광도증가,선립체DNAPCR확증미견목적조대,세포가확증출정위우mtDNA적500bp편단,건나록염색대조세포,가견산재람록색선립체,이가EB적세포미견선립체.결론후암세포o11경과추화을정지속작용90천배양출선립체DNA결실적ρ0o11후암세포,저충결실선립체DNA적세포계수보충외원성병동산화뇨감래유지기생존,부칙세포흔쾌사망.통과관찰세포적증식화분화발현,ρ0o11세포생장속도비미경EB처리적대조조만적다.
