中国畜牧兽医文摘
中國畜牧獸醫文摘
중국축목수의문적
ZHONGGUO XUMU SHOUYI WENZHAI(SHUOYI)
2012年
5期
45-46
,共2页
王琼%张利仙%李维薇%李冰%艾军%周晓黎
王瓊%張利仙%李維薇%李冰%艾軍%週曉黎
왕경%장리선%리유미%리빙%애군%주효려
猴嗜T淋巴白血病病毒%杆状病毒表达载体%昆虫细胞
猴嗜T淋巴白血病病毒%桿狀病毒錶達載體%昆蟲細胞
후기T림파백혈병병독%간상병독표체재체%곤충세포
根据已报道的STLV病毒gag蛋白基因(genbank登录号:AY590142),人工合成猴STLV病毒gag基因,通过BamHI和HindIII特异性酶切,将其克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了猴STLV病毒gag基因杆状病毒表达重组质粒pFastHTB-gag.该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、庆大霉素、四环素平板抗性筛选,PCR鉴定,表明获得了转座的杆粒Bacmid-gag.在此基础上,提取Bacmid-gag杆粒,并转染Sf9昆虫细胞,96h后反复冻融细胞,收集上清液,获得杆状病毒,并用来Sf9细胞,收获目的蛋白.通过SDS-PAGE和western bloting分析表明初步获得了表达的gag蛋白且具有良好的生物活性,大小约为52kD,为下一步以表达的gag蛋白为诊断抗原,替代现阶段以分离的病毒抗原和HTLV相关蛋白作为抗原的猴STLV病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础.
根據已報道的STLV病毒gag蛋白基因(genbank登錄號:AY590142),人工閤成猴STLV病毒gag基因,通過BamHI和HindIII特異性酶切,將其剋隆于昆蟲桿狀病毒錶達載體pFastBacHTB,經PCR、酶切及測序鑒定,成功地構建瞭猴STLV病毒gag基因桿狀病毒錶達重組質粒pFastHTB-gag.該重組質粒轉化含有桿狀病毒穿梭載體的DH10BAC感受態細胞,經卡那黴素、慶大黴素、四環素平闆抗性篩選,PCR鑒定,錶明穫得瞭轉座的桿粒Bacmid-gag.在此基礎上,提取Bacmid-gag桿粒,併轉染Sf9昆蟲細胞,96h後反複凍融細胞,收集上清液,穫得桿狀病毒,併用來Sf9細胞,收穫目的蛋白.通過SDS-PAGE和western bloting分析錶明初步穫得瞭錶達的gag蛋白且具有良好的生物活性,大小約為52kD,為下一步以錶達的gag蛋白為診斷抗原,替代現階段以分離的病毒抗原和HTLV相關蛋白作為抗原的猴STLV病毒ELISA檢測試劑盒的研製奠定瞭基礎.
근거이보도적STLV병독gag단백기인(genbank등록호:AY590142),인공합성후STLV병독gag기인,통과BamHI화HindIII특이성매절,장기극륭우곤충간상병독표체재체pFastBacHTB,경PCR、매절급측서감정,성공지구건료후STLV병독gag기인간상병독표체중조질립pFastHTB-gag.해중조질립전화함유간상병독천사재체적DH10BAC감수태세포,경잡나매소、경대매소、사배소평판항성사선,PCR감정,표명획득료전좌적간립Bacmid-gag.재차기출상,제취Bacmid-gag간립,병전염Sf9곤충세포,96h후반복동융세포,수집상청액,획득간상병독,병용래Sf9세포,수획목적단백.통과SDS-PAGE화western bloting분석표명초보획득료표체적gag단백차구유량호적생물활성,대소약위52kD,위하일보이표체적gag단백위진단항원,체대현계단이분리적병독항원화HTLV상관단백작위항원적후STLV병독ELISA검측시제합적연제전정료기출.
