浙江大学学报(农业与生命科学版)
浙江大學學報(農業與生命科學版)
절강대학학보(농업여생명과학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2012年
5期
575-584
,共10页
卢艳%薛永常%于鹏%王平章
盧豔%薛永常%于鵬%王平章
로염%설영상%우붕%왕평장
克隆%辅脂酶%人辅脂酶样3基因
剋隆%輔脂酶%人輔脂酶樣3基因
극륭%보지매%인보지매양3기인
为发现新的辅脂酶样家族成员通过EST拼接获得1个新的人类辅脂酶样蛋白编码基因hCLPSL3humancolipaselike3同时通过同源性分析对小鼠Musmusculus、大鼠Rattusnorvegicus同源基因Clpsl3的完整编码区进行分析和预测.利用RTPCR技术以人细胞系cDNA为模板成功扩增到hCLPSL3的2个转录变异体即hCLPSL3v1和v2前者包含完整的开放阅读框架ORF后者 ORF被提前终止密码子prematurestopcodonPTC中断hCLPSL3v1包含159个氨基酸含有1个典型的信号肽2个高度同源的内部序列重复区以及2个不完整的辅脂酶样结构域.通过真核表达载体构建在人293T细胞中以过表达方式证实了hCLPSL3v1能够分泌.通过RTPCR技术在小鼠肾、结肠和脾脏组织中各获得1个Clpsl3转录变异体序列分别称为mCLPSL3v1、v2和v3其中 mCLPSL3v1包含完整的编码区编码产物含161个氨基酸而mCLPSL3v2和v3的ORF均被PTC中断从大鼠结肠和小肠组织中克隆到大鼠Clpsl3的cDNA序列即rCLPSL3其编码162个氨基酸.此外CLPSL3在哺乳动物中广泛存在基因结构相似均含有高度保守的18个半胱氨酸推测与二硫键形成有关.这些工作为CLPSL3的功能研究奠定了基础.
為髮現新的輔脂酶樣傢族成員通過EST拼接穫得1箇新的人類輔脂酶樣蛋白編碼基因hCLPSL3humancolipaselike3同時通過同源性分析對小鼠Musmusculus、大鼠Rattusnorvegicus同源基因Clpsl3的完整編碼區進行分析和預測.利用RTPCR技術以人細胞繫cDNA為模闆成功擴增到hCLPSL3的2箇轉錄變異體即hCLPSL3v1和v2前者包含完整的開放閱讀框架ORF後者 ORF被提前終止密碼子prematurestopcodonPTC中斷hCLPSL3v1包含159箇氨基痠含有1箇典型的信號肽2箇高度同源的內部序列重複區以及2箇不完整的輔脂酶樣結構域.通過真覈錶達載體構建在人293T細胞中以過錶達方式證實瞭hCLPSL3v1能夠分泌.通過RTPCR技術在小鼠腎、結腸和脾髒組織中各穫得1箇Clpsl3轉錄變異體序列分彆稱為mCLPSL3v1、v2和v3其中 mCLPSL3v1包含完整的編碼區編碼產物含161箇氨基痠而mCLPSL3v2和v3的ORF均被PTC中斷從大鼠結腸和小腸組織中剋隆到大鼠Clpsl3的cDNA序列即rCLPSL3其編碼162箇氨基痠.此外CLPSL3在哺乳動物中廣汎存在基因結構相似均含有高度保守的18箇半胱氨痠推測與二硫鍵形成有關.這些工作為CLPSL3的功能研究奠定瞭基礎.
위발현신적보지매양가족성원통과EST병접획득1개신적인류보지매양단백편마기인hCLPSL3humancolipaselike3동시통과동원성분석대소서Musmusculus、대서Rattusnorvegicus동원기인Clpsl3적완정편마구진행분석화예측.이용RTPCR기술이인세포계cDNA위모판성공확증도hCLPSL3적2개전록변이체즉hCLPSL3v1화v2전자포함완정적개방열독광가ORF후자 ORF피제전종지밀마자prematurestopcodonPTC중단hCLPSL3v1포함159개안기산함유1개전형적신호태2개고도동원적내부서렬중복구이급2개불완정적보지매양결구역.통과진핵표체재체구건재인293T세포중이과표체방식증실료hCLPSL3v1능구분비.통과RTPCR기술재소서신、결장화비장조직중각획득1개Clpsl3전록변이체서렬분별칭위mCLPSL3v1、v2화v3기중 mCLPSL3v1포함완정적편마구편마산물함161개안기산이mCLPSL3v2화v3적ORF균피PTC중단종대서결장화소장조직중극륭도대서Clpsl3적cDNA서렬즉rCLPSL3기편마162개안기산.차외CLPSL3재포유동물중엄범존재기인결구상사균함유고도보수적18개반광안산추측여이류건형성유관.저사공작위CLPSL3적공능연구전정료기출.